周芮伊1 金焰2 吴楠3 吴冠男4 宋洁*1
牡丹江医学院 黑龙江省牡丹江市 157000
哈尔滨医科大学 黑龙江省哈尔滨市 150000
哈尔滨医科大学附属第三医院 黑龙江省哈尔滨市150000
【摘要】目的：探讨雌激素通过调控染色体缩合调控子2（RCC2）参与乳腺癌细胞凋亡的情况。方法：选择我院2017年1月~2021年1月保存的44例乳腺组织进行研究，其中包括乳腺癌32例与乳腺纤维瘤12例，而乳腺癌中雌激素受体阳性（阳性组）20例、雌激素受体阴性（阴性组）12例，均用蛋白免疫印迹法检测RCC2蛋白表达水平，用过雌二醇、RCC2小干扰RNA及二者联合处理MCF-7细胞，对细胞增殖与凋亡情况进行检测，进行组间比较分析。结果：乳腺癌组织中阳性组RCC2表达水平明显高于乳腺纤维瘤组织（P<0.05），而阴性组与乳腺纤维瘤组织比较无明显差异（P>0.05）；雌二醇和RCC2小干扰RNA交互效应在MCF-7细胞增殖上比较差异不明显（P>0.05），但在细胞凋亡上比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：乳腺癌细胞凋亡中可能有雌激素调控RCC2来参与其中，从而对雌激素受体阳性癌变进展有促进作用。
【关键词】乳腺癌；细胞凋亡；雌激素；染色体缩合调控子2；表达水平
乳腺癌作为全球女性最为常见的一种恶性肿瘤疾病，也是影响女性身心健康最为棘手的疾病之一。研究发现，在乳腺癌中雌激素受体阳性占了70%左右，尽早明确诊断与治疗，对于提高预后有着积极的意义。乳腺癌早期诊断以影像学诊断为主，探索诊断与判断预后的明显基因对于临床有着重要的作用[1]。染色体缩合调控子2（RCC2）在胃癌组织中有明显上调，可筛选结直肠癌高危人群，随着对其研究深入，发现RCC2可诱导上皮细胞-间充质转化促进肺腺癌转移[2]。虽然RCC2和多种肿瘤疾病发生与发展有关，但其是否参与乳腺癌的发生、发展，还有待进一步探究。本次就雌激素通过调控RCC2参与乳腺癌细胞凋亡的情况进行了研究，现将2017年1月~2021年1月保存的44例乳腺组织进行了分析，报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料来源
选择我院2017年1月~2021年1月保存的44例乳腺组织进行研究，其中包括乳腺癌32例与乳腺纤维瘤12例，而乳腺癌中雌激素受体阳性（阳性组）20例、雌激素受体阴性（阴性组）12例。乳腺癌细胞株MCF-7购自中科院上海生命科学研究院细胞资源中心。
1.2 试剂
日本同仁公司的Kit-8细胞增殖试剂，美国Cell Signaling Technoloy供公司的兔抗人RCC2单克隆抗体，以及美国Bio Legend公司的Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒。
1.3 方法
对乳腺癌细胞进行培养后选择蛋白免疫印迹法检测RCC2蛋白表达水平，提取组织蛋白，称量50mg乳腺组织，加裂解液充分研磨，冰上裂解半小时，离心处理半小时，取上清液，经95℃变性15min，保存在-80℃待检。提取细胞蛋白，转染72h，收集细胞，按照前述步骤执行。取50μ蛋白实施SDS-PAGE凝胶电泳实验，将蛋白恒流转到PVDF膜，RCC2单克隆抗体4℃过夜，然后二抗37℃孵育2h，以ECL发光液用荧光成像仪测定蛋白表达水平。利用雌激素刺激实验测定MCF-7细胞增殖与凋亡情况，首先配制雌激素，用无水乙醇为溶剂，将雌二醇配制为储存液，以无酚红DMEM加葡聚糖-活性炭吸附处理的胎牛血清配制为不同浓度的雌二醇及含无水乙醇的对照组；利用试剂盒检测细胞增殖情况，方法同上；利用流式分析仪检测细胞凋亡情况，方法同上。
1.3 统计学分析
数据分析软件为SPSS22.0，计数资料%表示、χ2检验，计量资料表示、t检验， P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 各组组织中RCC2表达水平比较
乳腺癌组织中阳性组RCC2表达水平明显高于乳腺纤维瘤组织（P<0.05），而阴性组与乳腺纤维瘤组织比较无明显差异（P>0.05），见表1。
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2.2 雌二醇与RCC2小干扰RNA对MCF-7细胞增殖与凋亡的影响
通过对MCF-7细胞转染24h后，加雌二醇或含乙醇的无酚红DMEM处理48h，观察两种因素下细胞增殖与凋亡情况，显示：雌二醇与RCC2小干扰RNA二者在MCF-7细胞增殖方面的交互效应无明显差异（F=0.287，P>0.05），而在MCF-7细胞凋亡方面交互效应则有统计学意义（F=18.449，P<0.05），且显示加入雌二醇会抑制细胞凋亡，而RCC2小干扰RNA则可促进细胞凋亡。
3 讨论
乳腺癌在近几年发病率居高不下，是导致女性死亡最为主要的恶性肿瘤疾病之一，研究发现在中老年乳腺癌患者中雌激素受体阳性者占了主要部分，可见雌激素在乳腺癌发生与发展中发挥了一定的作用[3]。RCC2作为染色体乘客复合体一员，目前已证实在黑色素瘤、胃癌、肺腺癌、结直肠癌等高危人群中有明显上调，但关于在乳腺癌中的研究还比较缺乏。
本次就我院保存的44例乳腺组织进行研究，其中包括乳腺癌32例与乳腺纤维瘤12例，结果显示：乳腺癌组织中阳性组RCC2表达水平明显高于乳腺纤维瘤组织（P<0.05），而阴性组与乳腺纤维瘤组织比较无明显差异（P>0.05）；雌二醇和RCC2小干扰RNA交互效应在MCF-7细胞增殖上比较差异不明显（P>0.05），但在细胞凋亡上比较差异有统计学意义（P<0.05）。研究中看出雌激素受体阳性的乳腺癌患者其组织中RCC2表达水平明显高于雌激素受体阳性患者与乳腺纤维瘤患者，说明RCC2高表达水平可能参与了雌激素受体阳性乳腺癌的进展。在同类研究中探究了RCC2在雌激素受体阳性乳腺癌中的生物学功能，发现抑制RCC2在MCF-7中的表达能促进癌变细胞的凋亡，但对细胞增殖则无干扰，可见抑制RCC2会影响乳腺癌细胞中MCF-7细胞的凋亡[4]。同时，RCC2可参与细胞有丝分裂及其组装，而RCC2作为一种纤维蛋白依赖黏附信号通路的调控者，在细胞扩散、定向迁移中也有影响。不过，就目前国内已有的研究还难以看出RCC2是经何种途径调控细胞凋亡，国外的研究中认为可能和细胞的有丝分裂有关[5]，而RCC2和凋亡抑制基因等共同参与细胞有丝分裂组装，进而调控细胞的凋亡，但具体途径依旧不明确。
综上所述，乳腺癌细胞凋亡中可能有雌激素调控RCC2来参与其中，从而对雌激素受体阳性癌变进展有促进作用。
【参考文献】
[1]王伟琦,郑亚冰,李昌, 等.雌激素通过调控RCC2参与乳腺癌细胞凋亡[J].新医学,2018,49(4):248-254.
[2]张景臣,刘薇,毛大华.乳腺癌中凋亡细胞比率与雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子-2表达的相关性研究[J].中国卫生检验杂志,2019,29(2):218-220.
[3]陈玉忠,韩福生,许磊, 等.紫草素对乳腺癌MCF-7细胞雌激素受体的表达和增殖及凋亡的影响[J].山西医科大学学报,2016,47(8):724-728.
[4]叶敏,刘志强,王李俊, 等.猪苓酮A通过调节Bcl-2/Bax信号通路诱导雌激素受体阴性的乳腺癌细胞凋亡研究[J].中草药,2018,49(22):5334-5338.
[5]黄飞翔,向廷秀,任国胜.驱动蛋白KIF18B对ER+乳腺癌细胞增殖、凋亡的影响及其临床意义[J].第三军医大学学报,2019,41(18):1738-1743.