白血病细胞K562在苦参碱作用下凋亡的研究

发表时间:2019/2/19   来源:《心理医生》2019年第2期   作者:薛钰婷1 冷波2(通讯作者)
[导读] 研究苦参碱是否有诱导白血病细胞株k562凋亡的作用,了解不同浓度苦参碱对k562凋亡的影响以及诱导k562凋亡的最佳浓度。期望能在中药里寻找一种新药可单用或联合其它药物使用后,能减轻患者症状,提高生存质量
薛钰婷1  冷波2(通讯作者)  
        (1西南医科大学附属医院重症医学科  四川泸州  646000)
        (2西南医科大学附属中医医院普外科  四川泸州  646000)
        【摘要】目的:研究苦参碱是否有诱导白血病细胞株k562凋亡的作用,了解不同浓度苦参碱对k562凋亡的影响以及诱导k562凋亡的最佳浓度。期望能在中药里寻找一种新药可单用或联合其它药物使用后,能减轻患者症状,提高生存质量。方法:(1)用含5%胎牛血清的RPMI1640培养基于25ml的培养瓶中,培养人白血病细胞株k562,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,每2~3天传代一次,取对数生长期的细胞进行实验。(2)将细胞浓度调整为5×102/ml的细胞悬液接种于六孔板,每孔加细胞悬液2ml,第一孔加2ml培养基为阴性组,其余五孔分别加入终浓度为0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml的苦参碱2ml为实验组,作用72h后酶联免疫吸附法(ELISA法)检测抗凋亡蛋白(BCL-XL)表达情况。结果:酶联免疫吸附法(ELISA法)检测抗凋亡蛋白(BCL-XL)结果显示不同浓度的苦参碱(0.25mg/ml、0.5mg/ml、1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml)对BCL-XL都有抑制作用,随着苦参碱浓度增加抗凋亡蛋白BCL-XL降低。结论:苦参碱可通过降低抗凋亡蛋白而诱导k562细胞凋亡。苦参碱有希望成为临床治疗白血病的一种药物,联合其他化疗药物可能达到更好效果。
        【关键词】苦参碱;k562细胞;凋亡
        【中图分类号】R285                    【文献标识码】A                     【文章编号】1007-8231(2019)02-0015-02
        Study on the induced action of Matrine towards the apoptosis of leukemia cells K562
        【Abstract】Objective The purpose of this thesis is to study if Matrine can induce the apoptosis of leukemia cells and understand the action of Matrine of different concentrations towards the hyperplasia or apoptosis of leukemia cells to find out the best concentration of Matrine for inducing apoptosis of leukemia cells; thus, identify a new type of medicine able to be used or used together with other medicines to alleviate the symptoms and improve the living quality of patients. Methods (1)Culture human leukemia cells k562 in a 25ml culture flask containing 5% FBS RPMI1640 medium, and place it in an incubator of 37℃, 5% CO2 and saturated humidity. Subculture it every 2~3 days and take cells of logarithmic phase for experiments. (2) The cell concentration by 5×102/ml cell upon a hole in the inoculation, every pore mouth dripped into the liquid 2ml, the first hole with a feminine 2ml culture, the remaining five are in a different alkali 2ml in the concentration of bitter to experiment, 72h the role of the enzyme immune to the law of the inspection(elisa)the apoptosis protein (bcl- xl) to express conditions. Results The enzyme immune to the method of detecting (elisa) the apoptosis protein (bcl-xl) result in different levels of alkali bcl-xl to have a restraining, as alkali hard for an increase in the concentration of the apoptosis contain protein bcl-xl reduced. Conclusion In the bitter alkali reduce the apoptosis cells contain protein and induced k562 the apoptosis. Having alkali hard to become a clinical leukemia treated with a drug, other drugs may be the chemotherapy better effect.
        【Key words】 k562 cells; Apoptosis ; Propagates
       
        急性髓细胞白血病(Acute myelocytic leukemia,AML)是造血干细胞恶性克隆性疾病。从流行病学调查可显示,职业、环境因素及遗传与AML的发病密切相关。发达国家的发病率高于发展中国家,西方国家发病率高于东方国家,世界各地年发病率为2.25/10万人口。调查显示30岁以下为1/10万、75岁以上则高达17/10万,可见随年龄增加而发病率呈上升趋势。抑制白血病细胞的增殖、促进凋亡,是治疗白血病的重要手段之一,因此,努力寻找有效而且毒副作用小的抗肿瘤药物,是医学界重要的研究课题。
        1.材料与方法
        1.1 材料
        人白血病细胞株k562。
        1.2 实验方法
        酶联免疫吸附法(ELISA法)检测凋亡蛋白(bcl-xl)。
        1.2.1取对数生长期细胞,将细胞浓度调整为5×102个/ml接种于六孔板,实验设计六个组,其中一个阴性组,五个实验组。
        1.2.2细胞离心1000r/5min,收集上清液各400ul分组放入EP管备用(即下文所述样品组)。
        1.2.3稀释标准品:试剂盒保存冰箱,使用之前在室温放置30分钟。配制120ul标准品稀释液和120ul的原倍标准品(1号),配制120ul1号标准品和120ul的标准品稀释液(2号),然后取120ul2号标准品加入120ul的标准品稀释液(3号),120ul3号标准品加入120ul的标准品稀释液(4号),120ul4号标准品加入120ul的标准品稀释液(5号)。
        1.2.4分别设置有空白组(空白组不加样品和酶标试剂,其余各操作步骤与实验组相同),标准品组,待测样品组。在酶标包被板上标准品组分别加入稀释好的标准品50ul,待测样品组加入样品稀释液40ul,然后再加入待测样品10ul。轻轻晃动混匀,置于37℃温育30min。
        1.2.5每孔加入酶标试剂50ul(空白组除外),轻轻晃动混匀,置于37℃温育30min。
        1.2.6每孔加入显色剂A50ul(空白组除外),再加入显色剂B50ul,轻轻晃动混匀,37℃避光显色10min。
        1.2.7取出酶标板,每孔加入终止液50ul,终止反应,此时颜色由蓝色转为黄色。
        1.2.8终止液加入后15min内,在酶标仪450nm波长下测量各孔的吸光度值(OD值)。
        2.结果
        不同浓度的苦参碱作用于k562细胞均能降低凋亡抑制蛋白bcl-xl,随苦参碱浓度增加,凋亡抑制蛋白bcl-xl浓度降低,其抑制率随药物浓度的增加而增高。见表1。
        
                
        
        3.讨论
        白血病(leukemia)是一种造血干细胞的恶性克隆性疾病。其克隆的癌细胞出现增值失控、分化障碍、凋亡受阻,从而停滞在细胞发育的不同阶段。研究表明TFA具有抗损伤、抗突变、抗肿瘤和抑制动脉粥样硬化等多种生物学效应.,对k562细胞有诱导凋亡作用[1]。如丹参酮衍生物有抑制k562细胞增值作用,阻滞其于G0/G1期并诱导细胞凋亡[2]。如猪苓多糖是由中药猪苓中提取的一种多糖,研究证实其具有抑制肿瘤生长和增强肿瘤患者机体免疫功能的作用,与化学药物联合应用可增强疗效和减轻副作用,它对白血病细胞k562有诱导分化作用[3]。如三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯单独及联合环磷酰胺作用于白血病细胞k562,结果显示作用后k562细胞的存活率下降。当与环磷酰胺联合应用后,抑制作用更明显[4]。这些表明中药及植物提取物在白血病治疗中可以发挥巨大作用,为研发治疗白血病经济、有效、毒副作用小的新药开辟新途径。
        有研究报道苦参碱可以明显的抑制肿瘤细胞与内皮细胞的黏附作用,并可明显抑制CD44黏附因子的表达,还可以减轻内皮细胞的通透性,保护内皮细胞的完整,阻断肿瘤细胞与基质的黏附,从而减少了肿瘤转移的形成[5]。
        人bcl-xl酶联免疫检测试剂盒是采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA法)检测样品中人Bcl-xl的水平。本实验我们收集不同浓度苦参碱作用k562细胞的上清液作为样品,采用上述ELISA法检测样品中Bcl-xl的浓度,通过结果分析药物不同浓度苦参碱能够降低抗凋亡蛋白Bcl-xl,且呈剂量依赖性,并用统计学分析不同浓度组间有统计学意义。
        总之,我们的研究显示苦参碱对白血病细胞k562有明显抑制作用,可通过降低抗凋亡蛋白bcl-xl诱导k562凋亡。
       
        【参考文献】
        [1]张冬青等.黄芪总黄酮对k562细胞凋亡及细胞周期的影响[J].中国药理学通报,2010;26(1).
        [2]甑霞等.丹参酮衍生物对k562细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究[J].中国药理学通报,2008;24(7).
        [3]姚仁南,黄晓静.猪苓多糖对HL-60和k562癌细胞株的诱导分化作用[J].山东医药,2005;45(14).
        [4]王一,方美云.三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯联合环磷酰胺对k562细胞株端粒-端粒酶系统的作用[J].中国实验血液学杂志,2006;14(6).
        [5]林洪生,等.苦参碱对癌细胞与内皮细胞粘附及粘附因子表达的影响[J].中国新药杂志,1999;8(6):384-386.
       
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