化学发光法与ELISA法测定血清癌胚抗原的比较

发表时间:2019/1/9   来源:《心理医生》2018年36期   作者:仇婷婷
[导读] 癌胚抗原(CEA)是一种糖蛋白,它存在于2~6个月胎儿消化系统(胃肠道、胰腺、肝脏)内,能被肝脏摄入并迅速地崩解。

(黑龙江省中医药科学院  黑龙江哈尔滨  150036)
  【摘要】目的:探讨化学发光法与ELISA法测定血清癌胚抗原(CEA)的方法结果。方法:选取2017年6月—2018年6月期间收治的消化系统肿瘤患者100例为研究对象,抽取患者血清样本进行血清癌胚抗原测定,对两种方法的阳性率进行比较。结果:分别用化学发光法和ELISA法的血清癌胚抗原测定阳性率分别为53.0%和55.0%,两组阳性率无显著差异无统计学意义(P>0.05)。结论:化学发光和ELISA法对血清癌胚抗原(CEA)含量较为准确,有较高的一致性,对消化系统肿瘤患者的诊断具有良好诊断价值。
  【关键词】化学发光法;ELISA法;测定;血清癌胚抗原
  【中图分类号】R446.6                  【文献标识码】A                     【文章编号】1007-8231(2018)36-0062-02
  癌胚抗原(CEA)是一种糖蛋白,它存在于2~6个月胎儿消化系统(胃肠道、胰腺、肝脏)内,能被肝脏摄入并迅速地崩解。大多数结肠癌组织能合成CEA,而未分化腺癌或癌细胞分化极低者无合成CEA的能力。此外,CEA也可由正常或炎症性肠黏膜产生。目前,癌胚抗原(CEA)主要作为结肠癌术后复发的信号和疑有结肠癌患者的辅助诊断。临床实验室应用较普遍的方法有ELISA法、放射免疫法(RIA)、化学发光法等[1],本研究对化学发光法和ECLIA法检测CEA的结果可比性进行评估,为高通量ELISA法检测癌胚抗原(CEA),现将检测结果分析如下。
  1.资料与方法
  1.1 一般资料
  选取2017年6月—2018年6月期间收治的消化系统肿瘤患者100例为研究对象,其中男56例,女44例,年龄35~74岁,平均年龄53.5±3.5岁。
  1.2 方法
  静脉血5ml或胸腹水5~10ml,用血清避免使用肝素抗凝。或用红帽真空管或黄帽真空管静脉采血,分离血清后如不能立即测定应冷冻。
  1.2.1 ELISA法  按照试剂盒说明书操作。操作步骤如下:取出试剂盒平衡至室温(18~25℃),取出微孔反应板条,按要求配好试剂。在已包被抗CEA抗体的孔中加入待测血清(或其他检样)100μl,37℃1小时。用洗涤液洗孔5次。将CEA标准品(0、3、5、10、20ng/ml)和阴性对照、阳性对照与检样按同法同时进行操作,同时设空白对照孔。每孔加酶(HRP)标记抗CEA单克隆抗体100μl(空白孔不加),37℃1小时后洗孔 5次。叩干孔内液体,每孔加酶底物/色原溶液100μl,37℃避光反应15分钟呈色。每孔加2mol/L H2S0450μl终止反应。用酶联仪在相应波长测吸光度。


计算以标准品的浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标,在半对数坐标纸上绘出校正曲线,根据样品的吸光度值由校正曲线杏出相应的浓度;或用标准品的浓度与吸光度值计算出校正曲线的直线回归方程式,将样品的吸光度值代人方程式,计算出样品浓度[2]。
  1.2.2化学发光法  采用Access全自动微粒子酶免疫化学发光仪,按照仪器操作说明书进行,分离血清上机包括加样、分离、搅拌、温育、打印结果等各项操作自动完成。
  1.3 统计学处理分析
  采用SPSS20.0统计学软件对所有数据进行统计学分析,计量资料采用平均值±标准差(x-±s),t检验;计数资料采用百分比率(%)表示,χ2检验。以P<0.05为组间差异显著,有统计学意义。
  2.结果
  化学发光法和ELISA法检测血清CEA结果,按CEA浓度分为3组,化学发光法,<5ng/ml组(2.92±0.08)ng/ml,5~20ng/ml组(8.70±0.45)ng/ml,>20ng/ml组(46.10±3.31) ng/ml;ELISA法,<5ng/ml组(2.99±0.08)ng/ml,5~20ng/ml组(8.96±0.55)ng/ml,>20ng/ml组(43.75±3.38)ng/ml;两组检测结果比较差异不明显,无统计学意义(P>0.05)。
  化学发光法和ELISA法重复性比较,选择4份血清标本血清CEA浓度分别为5ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、90ng/mL的,分别采用化学发光法和ELISA法进行重复测定,化学发光法的变异系数(CV)分别为4.2%、3.4%、5.3%、4.4%,ELSIA法的CV分别为13.3%、14.2%、12.8%、14.6%,CV均小于15%的重复性合格。
  化学发光法和ELISA法检测血清CEA,化学发光法检测血清CEA阳性53例,阴性47例,阳性率53.0%;ELISA法检测血清CEA阳性55例,阴性45例,阳性率55.0%;化学发光法与ELISA法均为阳性53例,均为阴性45例;两组阳性率比较无明显差异,无统计学意义。
  3.讨论
  癌胚抗原(CEA)最初发现于成人结肠癌和胎儿组织中,因此提取物的抗原出现在胚胎细胞上,故称为癌胚抗原。CEA是一种结构复杂的可溶性糖蛋白,分子量约为180000,半寿期为14天,胚胎两个月后主要由胎儿的胃肠管、胰腺和肝脏分泌CEA,出生后消失。在成人CEA主要是由结肠黏膜细胞分泌到粪便中,一天约70mg,少量重吸收至血液。胃肠道恶性肿瘤时可见血清CEA升高,在乳腺癌、肺癌及其他恶性肿瘤患者的血清中也有升高。因此认为,CEA是一种广谱肿瘤标志物,虽然不能作为诊断某种恶性肿瘤的特异性指标,但在恶性肿瘤的鉴别诊断、病情监测、疗效评价等方面,仍有重要临床价值[3]。
  血清CEA升高主要见于结肠癌、直肠癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、胰腺癌等,其他恶性肿瘤也有不同程度的阳性率。当CEA比正常持续升高5~10倍,强烈提示恶性肿瘤,特别是肠癌的存在。高水平的CEA可作为肿瘤已有转移的标志,因为CEA是一种细胞黏附分子,极易浸润和转移。
  ELISA法采用ELISA双抗体夹心法。用抗CEA单克隆抗体包被微孔板,将待测样本、标准品以及阳性和阴性对照等分别加入各孔中,反应后再加入酶结合物(HRP-抗CEA单克隆抗体),使特异性地形成-固相抗体CEA-酶标抗体复合物,充分洗涤后加酶底物/色原呈色。呈色强度与在测定工作范围内的样本中的CEA浓度成正比。
  CLIA法Access CEA分析是一个双位点夹心法的酶免疫分析,采用了两个针对CEA不同抗原位点的大鼠抗-CEA单抗。将化学发光底物加入反应管,与反应体系中存在的碱性磷酸酶进行反应,发出的光量子被光电比色计所检测。产生的光量子与样本的CEA浓度成正比。最后,对照仪器中储存的多点定标曲线中所描述的光量子与标准品CEA的对应关系而计算出样品中的CEA浓度。
  本研究表示,化学发光和ELISA法对血清癌胚抗原(CEA)含量较为准确,对消化系统肿瘤患者的诊断具有良好诊断价值。
  
  【参考文献】
  [1]郝梦,叶强,马瑛龙.两种方法检测癌胚抗原的结果对比[J]. 医疗装备,2016,29(18):89-89
  [2]牟晓峰,周爱凤,赵自云,陈娟,于华.高通量ELISA法与电化学发光法测定血清癌胚抗原的比较[J].国际检验医学杂志,2014(22):3088-3089
  [3]谢跃文,王强,夏洁.电化学发光和酶联免疫吸附法检测癌胚抗原和甲胎蛋白结果分析[J].国际检验医学杂志,2011,32(2):255-256.

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