SIRT6在炎症性肠病中的表达及意义

发表时间:2018/9/3   来源:《航空军医》2018年13期   作者:杨明 杨世荣
[导读] SIRT6是Sirtuins家族中的一员,具有组蛋白去乙酰化酶及ADP-核糖基转移酶活性,有研究显示其参与了机体多项生理病理过程,但在炎症性肠病中还未见报道。

(94647部队医院)
        摘要:SIRT6是Sirtuins家族中的一员,具有组蛋白去乙酰化酶及ADP-核糖基转移酶活性,有研究显示其参与了机体多项生理病理过程,但在炎症性肠病中还未见报道。本文通过DSS构建小鼠炎症性肠病模型,运用免疫组化分析实验组及对照组间小鼠结肠组织SIRT6表达差异情况,并收集68例炎症性肠病患者结肠镜活检标本,分析SIRT6表达高低与患者预后的关系。
        关键词:炎症性肠病;SIRT6;预后


        炎症性肠病是一种特发性肠道炎症性疾病,主要包括溃疡性结肠炎和克罗恩病,目前病因和发病机制尚不明确[1]。而长期反复的肠道炎症刺激是结直肠癌发病的重要因素之一,有研究显示SIRT6在结直肠癌中表达是显著降低的[2],但在炎症性肠病阶段还未见报道。本研究拟采用免疫组化的试验方法探究在小鼠炎症性肠病模型中SIRT6的表达情况以及炎症性肠病患者中SIRT6表达高低与预后的关系。
        1资料与方法
        1.1一般资料 选自中国人民解放军福州总院2015年1月至2018年1月间消化内科肠镜病理活检确诊为炎症性肠病患者标本68例,其中男性39例,女性29例,年龄38-73岁,平均年龄54.2岁。所有标本离体后30分钟之内储存在-80°冰箱中备用。
        1.2方法
        1.2.1动物模型 葡聚糖硫酸钠(dextra sulfate sodium,DSS)是一种硫酸多糖体,由蔗糖合成。实验组由纯净水配置3%DSS溶液饲喂6-8周龄的雄性C57BL/6J小鼠20只,连续5天,然后改用普通饮用水10天,称为一个循环,连续3个循环,对照组20只小鼠持续给予普通饮用水,并在实验组小鼠第三个循环结束后一起处死。DSS为美国MP公司生产,分子量为36000-50000。
        1.2.2 免疫组化 采用SP法,运用柠檬酸-磷酸氢二钠进行抗原修复,以及Abcam公司的DoubleStain IHC试剂盒(ab183285)进行抗原封闭和二抗孵育、DAB显色。SIRT6抗体选用Abcam公司(ab62739),并用PBS按照1:200比例进行稀释。
        1.2.3 判断标准 SIRT6染色阳性信号定位于细胞核,染色强度评分标准:不着色0 分,黄色1分,棕黄色2 分;黄褐色3 分。阳性细胞所占比例评分标准:阳性细胞数< 10%者0 分;10%~ 25% 者1 分;26%~ 50% 者2 分;51%~ 75% 者3 分;>75% 者4 分。两种评分乘积0~6 分为弱表达;6~ 12 分为强表达。
        1.3统计处理
        2 结果
        2.1 SIRT6在小鼠模型中的实验组与对照组的表达情况 免疫组化结果显示,SIRT6在小鼠结肠组织均显色在细胞核上,呈黄色粗大颗粒。


根据上述免疫组化评分标准,实验组小鼠SIRT6弱表达16只,强表达4只;对照组小鼠弱表达8只,强表达12只;运用T检验,双侧检验,α=0.05,两组之间SIRT6表达差异具有统计学意义(p<0.05),可认为实验组SIRT6表达较对照组显著降低。
        2.2 SIRT6在炎症性肠病患者中表达高低与预后的关系 通过将收集到的68例炎症性肠病患者的肠镜病理活检标本做成石蜡组织切片,并运用免疫组化分析患者病灶组织中SIRT6表达的情况。经分析SIRT6弱表达患者43例,强表达患者25例,两组患者之间年龄、性别无统计学差异(P>0.05),但SIRT6弱表达的患者较强表达患者病程长,炎症浸润深且范围广,药物治疗后复发常见(P<0.05)。
        3讨论
        SIRT6属于Sirt2蛋白家族中的一员,目前已知其拥有NAD+依赖的组蛋白去乙酰化和单ADP核糖基转移酶两种功能。SIRT6通过这两种功能在调控DNA修复、端粒维护、葡萄糖与脂质的代谢、炎症反应以及癌症的发生与发展等方面发挥重要作用[3]。有研究显示SIRT6可通过TNF-α下游途径发挥抗炎作用。TNF-α有激活促炎细胞因子NF-κB的作用,而SIRT6则被招募到NF-κB的核心亚基Rela,通过使Rela亚基调控的靶基因启动子部位的H3K9去乙酰化沉默NF-κB靶基因[4]。
        炎症性肠病是一种病因及发病机制不明的慢性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎和克罗恩病两种。由于临床上没有太好的办法治疗炎症性肠病,导致患者病情反复迁延,增加了患结直肠癌的概率。本研究通过DSS诱导小鼠炎性肠癌模型并收集患者肠镜活检标本进行免疫组化分析,得出炎症性肠病过程中SIRT6表达降低,且SIRT6低表达的患者临床预后较高表达的患者差,说明SIRT6在炎症性肠病进程中发挥了抗炎作用,因此SIRT6有望成为预测炎症性肠病患者预后以及治疗的靶点。

        参考文献
        [1]Kaser,A.,S.Zeissig,and R.S.Blumberg,Inflammatory bowel disease.Annu Rev Immunol,2010.28:p.573-621.
        [2]Tian,J.and L.Yuan,Sirtuin 6 inhibits colon cancer progression by modulating PTEN/AKT signaling.Biomed Pharmacother,2018.106:p.109-116.
        [3]Khan,R.I.,S.S.R.Nirzhor,and R.Akter,A Review of the Recent Advances Made with SIRT6 and its Implications on Aging Related Processes,Major Human Diseases,and Possible Therapeutic Targets.Biomolecules,2018.8(3).
        [4]Li,P.,et al.,SIRT6 Acts as a Negative Regulator in Dengue Virus-Induced Inflammatory Response by Targeting the DNA Binding Domain of NF-kappaB p65.Front Cell Infect Microbiol,2018.8:p.113.

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