重组人肿瘤坏死因子-α对鼻咽癌细胞CNE-2体外抗肿瘤作用研究 李鏖

发表时间:2018/9/3   来源:《航空军医》2018年13期   作者:李鏖 曾钟杰(通讯作者) 曾原
[导读] 目的 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)对鼻咽癌细胞CNE-2体外抗肿瘤作用的研究。

(重庆市巴南区中医院 401320)
        摘要:目的 探讨重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)对鼻咽癌细胞CNE-2体外抗肿瘤作用的研究。方法 以人鼻咽癌细胞CNE-2为细胞模型,用不同浓度rhTNF-α作用于体外培养的CNE-2鼻咽癌细胞,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测胸苷磷酸化酶(TP)。结果 rhTNF-α浓度分别为10 ng/ml,50 ng/ml,100 ng/ml,200 ng/ml时,TP表达水平分别为5.02±0.32ng/ml,15.38±1.05ng/ml,5.86±1.63ng/ml,44.31±2.17ng/ml,差异有统计学意义(F=23.43,P<0.01)。结论 rhTNF-α在体外能有效抑制鼻咽癌细胞CNE-2增殖,能剂量依赖性上调胸苷磷酸化酶的表达。
        关键词:rhTNF-α;鼻咽癌;CNE-2细胞;胸苷磷酸化酶


        鼻咽癌是我国南方常见恶性肿瘤之一,其发病率一直居于前例[1]。重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)是有抗肿瘤活性的细胞因子,但肿瘤细胞的异质性及敏感性各异,因而TNF-α存在毒副作用,限制了其临床应用。而新型重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)具低毒副作用、靶向性强等优点,其体外抗肿瘤效能明显升高[2]。胸苷磷酸化酶(TP酶)的表达水平能够预测肿瘤对药物的敏感性[3]。本研究为体外实验,选择人鼻咽癌细胞CNE-2为研究对象,探讨不同剂量rhTNF-α对TP酶的调节作用,为鼻咽癌的个体化治疗提供参考。
        1材料及方法
        1.1细胞系 人鼻咽癌细胞CNE-2由中山大学医学院生化教研室细胞库提供。本研究起始于2016年2月,止于2017年1月。
        1.2试剂 人rhTNF-α购于厦门特宝生物工程有限公司;胸苷磷酸化酶(TP)检测试剂盒购于美国B&D公司。
        1.3 方法
        1.3.1 细胞培养 将鼻咽癌CNE-2细胞接种于体积分数为10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养液中,在37℃、5%CO2培养箱中培养,2-3天传代1次。
        1.3.2 检测肿瘤细胞中TP水平 采用酶联免疫法(ELISA),严格参照ELISA试剂盒操作手册。
        1.4 统计学方法 采用SPSS20.0进行数据处理,计量资料采用x±s表示,多组间计量资料的比较采用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。
        2 结果
        2.1不同剂量rhTNF-α对鼻咽癌CNE-2细胞TP水平的影响
鼻咽癌CNE-2细胞TP表达水平在不同剂量rhTNF-α的作用下表达水平不同,随着rhTNF-α浓度的增加TP表达水平逐步升高,差异有统计学意义(F=23.43,P<0.01),各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

        表1  不同剂量RhTNF-α对CNE-2细胞TP酶水平的影响(x±s)

 

 


        注:a与对照组比较,t值分别为13.68,21.56,25.07,33.56,P<0.05;b与试验组A比较,t值分别为16.34,21.72,31.02,P<0.05;c与试验组B比较,t值分别为9.36,13.60,P<0.05;d与试验组C比较,t值为11.77,P<0.05
        3 讨论
        鼻咽癌在头颈部恶性肿瘤中占首位,可能与遗传因素和居住环境的空气受污染有关。筛选安全有效、副作用小的肿瘤靶向抗肿瘤药物一直是近年来的研究热点,TNF-α是迄今为止发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子,在体内外能特异性地直接杀伤肿瘤细胞,rhTNF-α既具有hTNF-α活性,稳定性较好,又具有导向杀伤作用,为TNF-α肿瘤靶向治疗开创了新思路[4]。TP酶是胸苷嘧啶代谢过程中的关键酶,在恶性肿瘤组织中活性明显高于周围正常组织3-10倍,且与肿瘤的浸润和转移有关,已成为化疗的靶向分子[5]。本研究中,随着rhTNF-α浓度的增加TP表达水平逐步升高(F=23.43,P<0.01),各组间两两比较差异显著(P<0.05),提示rhTNF-α能明显提高鼻咽癌细胞CNE-2 的TP表达水平,与报道[6]相吻合。200ng/ml的rhTNF-α作用时TP表达水平与10ng/ml时比较提高8倍多,说明了rhTNF-α对肿瘤细胞TP的调节作用有肿瘤细胞依赖性及剂量依赖性。rhTNF-α是如何上调TP酶蛋白的具体机制尚不清楚,研究[7]发现TNF-α可以提高结肠癌细胞的TP表达,主要通过II型受体(TNF-a R2)而不是I型受体来实现,TP活性的提高与TPmRNA的表达水平有关,R2受体在上调TP酶蛋白的表达中起了重要作用。
        总之,适当剂量rhTNF-α能明显上调CNE-2肿瘤细胞中TP的表达,毒副作用较少,是鼻咽癌治疗的一种可行方法。
        参考文献
        [1]连仕锋,季明芳,吴标华,等.EB病毒血清学筛查鼻咽癌高、中危人群的随访研究[J].中华预防医学杂志,2015,49(1):26-30.
        [2]黄璟,周毅.肿瘤坏死因子α及其抑制剂的研究进展[J].国际口腔医学杂志,2015,42(1):63-68.
        [3]叶钿均,王绮雯,张继民,等.慢病毒转染胸苷磷酸化酶基因增强5'-脱氧氟尿苷抗结肠癌细胞活性[J].中华肿瘤杂志,2015,37(1):18-24.
        [4]李敏,李舸,贾欢欢,等.不同浓度 hTNFα对软骨细胞及其基质相关基因表达的影响[J].中国骨质疏松杂志,2015,24(5):541-545.
        [5]吴月琴,白文启,李灵敏,等.结直肠癌中5-氟尿嘧啶代谢酶的表达及临床意义[J].临床与实验病理学杂志,2015,22(6):619-623,627.
        [6]周勇军,李龙平,王新华,等.rhTNF-α对人肝癌细胞HepG-2体外抗肿瘤作用研究[J].实用检验医师杂志,2015,21(3):158-163.
        [7] 王绮雯,刘剑,叶钿均,等.基于基因转染法的胸苷磷酸化酶高表达结肠癌细胞株的建立[J].广东医学,2015,22(1):30-34.
        作者简介:第一作者单位:重庆市巴南区中医院。职称:副主任医师。学历:本科。姓名:李鏖。性别:男。出生年月:19690409。籍贯:綦江区打通镇。研究方向:耳鼻咽喉科。地址:巴南区龙洲湾龙德路20号。邮编:401320。
        通信作者单位:重庆市巴南区人民医院,地址:重庆市巴南区鱼洞新农街2号,邮编:401320,职称主任医师,学历大学本科,姓名:曾钟杰,性别:男,出生年月:196503,籍贯:巴南区,研究方向:耳鼻咽喉头颈外科,第二作者曾原 同医院同科室

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