TRPV-1、PAR-2在GERD患者食管粘膜中的表达及其临床意义

发表时间:2018/8/20   来源:《健康世界》2018年14期   作者:买买提·依斯热依力 吾布力卡斯木·吾拉木 克力木·阿不都
[导读] 探讨TRPV-1、PAR-2在不同亚型胃食管反流病患者食管粘膜中的表达差异及其在食管高敏感性产生中的意义。

1.新疆维吾尔自治区人民医院普外微创研究所  新疆乌鲁木齐  830001
2.新疆维吾尔自治区人民医院微创,疝和腹壁外科  新疆乌鲁木齐  830001
3.新疆医科大学研究生学院  新疆乌鲁木齐  830001
        摘要:目的 探讨TRPV-1、PAR-2在不同亚型胃食管反流病患者食管粘膜中的表达差异及其在食管高敏感性产生中的意义。方法 按照纳入、排除标准选取2017年6月至2017年12月间在新疆维吾尔自治区人民医院住院收治的30例病人设为研究组,同期完成体检的健康受试者设为健康对照组。胃食管内镜下取食管齿状线上3cm 处的局部黏膜作为标本,后续采用RT-PCR方法检测TRPV-1、PAR-2 mRNA表达量。结果 30例研究对象中15例为NERD患者,15例为EE患者。健康对照组纳入研究的对象为10例。GERD组患者年龄(46.5±14.5)范围为18~60岁,其中,NERD组、EE组平均年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05)。GerdQ评分结果显示,NERD组、EE组的RDQ评分明显高于健康对照组(P<0.05)。RT-PCR结果显示,NERD、EE组患者食管粘膜中TRPV-1 和PAR-2 mRNA表达水平是对照(Control)组的近两倍,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 TRPV1和PAR-2在不同亚型GERD患者中表达量明显增加,而这些受体的高表达可能与食管高敏感性的产生有关。
        关键词:胃食管反流病;食管高敏感性;TRPV-1;PAR-2;
        Expression and clinical significance of TRPV-1 and PAR-2 in patients with         Gastroesophageal reflux disease
        Maimaiti·Yisireyili1,2,Wubulikasimu·Wulamu3,Kelimu·Abudureyimu1,2.
1Research Institute of General and Minimally Invasive Surgery,People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi,830001,China;
2Department of Minimally Invasive Surgery,Hernia and Abdominal Wall Surgery,People's Hospital of Xinjiang Uygur Autonomous Region,Urumqi,830001,China;
3Graduate School of Xinjiang Medical University,Urumqi,830054,China.
[Abstract] Objective To investigate the expression levels of TRPV-1 and PAR-2 in esophageal mucosa of patients with gastroesophageal reflux disease and its role in the esophageal hypersensitivity. Methods According to the inclusion and exclusion criteria,30 patients admitted to the people's hospital of Xinjiang Uygur autonomous region from June 2017 to December 2017 were selected as the study group. The healthy subjects were set as the healthy control group. Esophageal mucosa were taken,then RT-PCR method was performed for detecting mRNA expression of TRPV- 1,PAR-2. Results The healthy control group included 10 patients. The age of patients in GERD group was(46.5±14.5)and ranged from 18 to 60 years old,the mean age of NERD and EE group there was no statistical significance(P>0.05). GerdQ scores among NERD and EE group were higher than control group(P < 0.05). RT-PCR results showed that the expression level of TRPV-1 and PAR-2 mRNA in the esophageal mucosa of patients with NERD and EE groups was twice that of the control group(P <0.001). Conclusion The expression levels of TRPV1 and PAR-2 increased significantly in GERD patients,and may related to the formation of esophageal hypersensitivity.
        Key words:Gastroesophageal reflux disease;Esophageal hypersensitivity;TRPV-1;PAR-2;


        胃食管反流病(Gastroesophageal Reflux Disease,GERD)是以烧心和反酸为典型特征的消化道常见疾病[1]。GERD症状的产生除了与反流物的酸性程度及其量有关外,还可能和食管高敏感性的产生有关。食管高敏感性的产生机制尚不明确,可能与多种离子通道或相关受体表达的变化有关。瞬时电位香草酸亚型1(Transient Receptor Potential Vanilloid,TRPV-1)和蛋白酶激活受体2(Protease-activated Receptor,PAR-2)作为两种重要的酸敏感受体,可能与食管高敏感性的产生有关。本研究通过检测TRPV-1与PAR-2在不同亚型GERD患者食管粘膜中的表达情况,分析GERD患者症状与酸敏感受体表达间的相关性,探讨两种受体对食管敏感性的影响。
        1.资料与方法
        一、资料
        选取2017年6月至2017年12月间在新疆维吾尔自治区人民医院住院收治的30例病人设定为研究组,男15例,女15例。同期完成体检的健康受试者设定为健康对照组。研究组患者全例符合GERD典型症状及诊断标准。
        二、纳入标准
        1)最近1周中存在烧心,反流,非心源性胸痛(既往无心脏疾病相关病史,入院后完善心电图、心彩超加以排除),反酸四种反流相关症状至少其中之一 2)就诊前1周内未服用过任何止酸药物或胃动力药 3)性别不限,18-60岁之间  4)知情同意。
        三、排除标准
        1)吞咽困难,出血,体重下降,贫血等报警症状者 2)有食管,胃十二指肠手术史 3)食管狭窄,消化性溃疡,食管腺癌,Barrett食管及胃肿瘤者 4)胃镜检查禁忌证或不愿意接受胃镜检查者5)孕妇及哺乳期妇。
        四、组织标本处理
        对GERD组与非GERD组患者签署知情同意文件,胃食管内镜下取食管齿状线上3cm 处的局部黏膜作为标本,置于-80℃备用。
        五、定量RT-PCR
        采用实时定量RT-PCR方法检测TRPV-1和PAR-2 mRNA的表达。每例组织标本置于TRIzol试剂提取总RNA,采用天根公司Fast Quant RT试剂盒合成第一链cDNA。由上海生工生物工程股份有限公司设计并合成引物,各指标及GAPDH引物序列和扩增产物长度见表1。RT-PCR反应严格按照试剂盒操作说明进行。实时定量RT-PCR,反应体系为20μL,反应条件为:95℃ 2 min,然后95 ℃ 20 s,60 ℃ 20 s,72 ℃ 20 s,共40 循环。反应结束后由电脑自动得出荧光曲线及ct值,采用2—△△Ct 计算出各组目标基因的相对表达倍数。
        表1  定量RT-PCR引物序列及产物长度

 


        六、统计分析:
        运用SPSS 22.0软件进行分析,符合正态分布的计量资料均以(X±S)表示,两组间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。
        2.结果
        30例纳入研究的对象中15例为NERD患者,15例为EE患者。男女比例为1:1,健康对照组纳入研究的对象为10例,男女比例为1:1。GERD组患者年龄(46.5±14.5)范围为18~60岁,其中,NERD组平均年龄为38.4±12.6,EE组年龄平均年龄为43.2±16.8,三组间年龄、性别差异无统计学意义(p>0.05)。GerdQ评分结果显示,NERD组RDQ评分为(18.4±3.6)分,EE组RDQ评分为(20.4±4.1)分,健康对照组RDQ评分为(1.5±0.6)分,NERD、EE组RDQ积分明显高于对照组(P<0.05),而NERD组和EE组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR结果显示,见图1A,NERD、EE组患者食管粘膜中TRPV-1 mRNA表达水平是对照(Control)组的(NERD:1.24±0.1,EE:2.7±0.21)倍,差异具有统计学意义(P<0.001)。见图1B,NERD、EE组患者食管粘膜中PAR-2 mRNA表达水平是对照(Control)组的(NERD:1.45±0.14,EE:3.68±0.24)倍,差异具有统计学意义(P<0.001)。


        图1 各组患者食管组织TRPV-1、PAR-2 mRNA表达情况(n=10/组)
        A:食管TRPV-1 mRNA相对表达倍数B:食管PAR-2 mRNA相对表达倍数;*p<0.01,**p<0.001 vs正常组,#p<0.001 vs NERD
        3.讨论
        根据内镜下有无食管粘膜损伤及其组织学变化,GERD可分为三种类型:非糜烂性反流病(NERD)、糜烂性食管炎(EE)和Barrett食管(BE)[1]。临床研究报道称,当NERD组与EE组患者相比较时,前者大部分症状是由弱酸反流引起的,而且这些症状的发生不完全依赖于酸性反流物[2]。进一步通过内镜与组织学检查发现,将近60%的GERD患者食管粘膜未见明显病变;尽管EE和NERD患者在内镜下表现和组织学观察上有差异,但两者在反流症状发生的频率和烧心程度上无明显差异[3]。然而研究者提出,反流症状的产生可能与内脏高敏感性有关,GERD患者中VH主要表现为食管对酸的敏感性增加[4],因此也称为食管高敏感性。
        临床研究发现,健康对照组中的研究对象接受辣椒素注入之后,食管中TRPV-1受体表达上调,而且能够引起明显的烧心和胸痛等症状[5]。另外一项研究发现,NERD与EE患者食管粘膜固有层神经纤维、上皮内游离神经末梢及上皮细胞中TRPV1受体表达明显高于对照组[6]。此外,PAR2受体广泛存在于机体组织中,其在胃肠道上皮、周围及中枢神经系统。研究亦证实,PAR2的激活可增加周围神经元及脊髓背根神经节的兴奋性,通过ERK1/2、PKA等通路致敏TRPV-1受体,促进P物质的释放,进而调控内脏敏感性[7]。我们的实验结果表明,不同亚型GERD患者食管组织中PAR-2阳性细胞表达明显强于正常组,并其mRNA表达水平在GERD组患者中呈高表达。因此,结合以往研究报道,我们认为由TRPV1和PAR-2介导的食管高敏感性的产生机制中PAR-2可能处于主导作用。
        总之,TRPV1和PAR-2在不同亚型GERD患者中表达量明显增加。尤其对于NERD患者,他们虽然内镜下无明显食管粘膜损伤,但有明显的烧心、胸痛等症状。因此这些受体的高表达可能引起食管高敏感性,使GERD患者产生不适症状。然而,TRPV1和PAR-2受体抑制剂可能为GERD的治疗提供新的靶点。
参考文献:
[1]克力木阿不都热依木,张成,汪忠镐. 胃食管反流病与食管裂孔疝外科临床研究现状与争议[J]. 中华胃食管反流病电子杂志,2014,(1):4-6.
[2]Emerenziani S,Sifrim D,Habib FI,et al. Presence of gas in the refluxate enhances reflux perception in non-erosive patients with physiological acid exposure of the oesophagus[J]. Gut,2008,57(4):443-447.
[3]Mastracci L,Spaggiari P,Grillo F,et al. Microscopic esophagitis in gastro-esophageal reflux disease:individual lesions,biopsy sampling,and clinical correlations[J]. Virchows Arch,2009,454(1):31-39.
[4]Miwa H,Minoo T,Hojo M,et al. Oesophageal hypersensitivity in Japanese patients with non-erosive gastro-oesophageal reflux diseases[J]. Aliment Pharmacol Ther,2004,20 Suppl 1:112-117.
[5]Kindt S,Vos R,Blondeau K,et al. Influence of intra-oesophageal capsaicin instillation on heartburn induction and oesophageal sensitivity in man[J]. Neurogastroenterol Motil,2009,21(10):1032-e1082.
[6]Guarino MP,Cheng L,Ma J,et al. Increased TRPV1 gene expression in esophageal mucosa of patients with non-erosive and erosive reflux disease[J]. Neurogastroenterol Motil,2010,22(7):746-751,e219.
[7]Coelho AM,Vergnolle N,Guiard B,et al. Proteinases and proteinase-activated receptor 2:a possible role to promote visceral hyperalgesia in rats[J]. Gastroenterology,2002,122(4):1035-1047.


 
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