浅析麻疹病毒PCR检验的措施和效果

发表时间:2018/8/8   来源:《中国医学人文》2018年第6期   作者:韩宇 李晖
[导读] 麻疹病毒是导致急性病毒性呼吸系统感染的主要病原体,其临床表现以发热、出疹为主。

黑龙江省鸡西市疾病预防控制中心  158100
  [摘要] 目的 浅析麻疹病毒的聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检验措施及其检验效果。方法 此次研究的对象是选取2014年1月—2016年12月期间本疾控中心接到各辖区内上报的160例疑似麻疹病例,将其临床资料进行回顾性分析,所有患者均采集咽拭子、血液标本送检,咽拭子采取PCR检验,血液标本采取ELISA法检验,比较两种方法对麻疹病毒的检测结果。结果 160例疑似麻疹病例中,经两种方法检测后排除23例风疹病毒阳性病例,剩余137例病例中,发病后4 d内,PCR检验对麻疹病毒的阳性检出率明显高于ELISA法检验(80.28% vs 60.56%,P<0.05),而在发病4天后,PCR检验对麻疹病毒的阳性检出率与ELISA法检验比较差异无统计学意义(81.82% vs 78.79%,P>0.05)。ELISA法检验结果为阴性而PCR检验为阳性的病例中,其检测时间多分布于发病后1~4 d内。 结论 在麻疹病毒的病原学检测中,PCR检验可对早期麻疹患者进行诊断,还可对早期ELISA法诊断为阴性的患者进一步诊断,可有效减少漏诊,具有较高的辅助诊断价值。
  [关键词] 麻疹病毒;PCR检验;ELISA;检验医学
  [Objective] to analyze measles virus polymerase chain reaction (PCR) test and its test results. Methods the object of the study was to select 160 cases of suspected measles reported from the CDC from January 2014 to December 2016. The clinical data were analyzed retrospectively. All the patients collected swabs and blood samples, the pharynx swabs were examined by PCR, and the blood samples were tested by ELISA method. The results of measles virus detection were compared with the two methods. Results in 160 cases of suspected measles, 23 cases of rubella virus positive cases were excluded after two methods. In the remaining 137 cases, the positive rate of PCR test for measles virus was significantly higher than that of ELISA assay (80.28% vs 60.56%, P<0.05), and PCR test was positive for measles virus after 4 days. The detection rate was not significantly different from that of ELISA test (81.82% vs 78.79%, P>0.05). In the case with negative ELISA test and positive PCR test, the detection time was mostly distributed within 1~4 d after the onset of the disease. Conclusion in the detection of measles virus, PCR test can be used to diagnose early measles patients and can be further diagnosed by early ELISA diagnosis, which can effectively reduce missed diagnosis and have high diagnostic value.
  [Keywords] measles virus; PCR test; ELISA; Laboratory Medicine
  麻疹病毒是导致急性病毒性呼吸系统感染的主要病原体,其临床表现以发热、出疹为主,具有较高的发病率和传染性,多发生于儿童人群,对儿童的身心健康较为不利[1-2]。对麻疹病毒予以早期检出,有利于及时采取干预措施,避免麻疹暴发,但由于麻疹病毒与风疹病毒较为相似,在早期诊断时容易混淆,故还需进一步对二者进行鉴别区分。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种新型的实验室检测技术,多被用于病原微生物核酸的快速检测中,该研究为探讨麻疹病毒的PCR检验措施及其检驗效果,方便收集2014年1月—2016年12月期间160例疑似麻疹病例的咽拭子、血液标本分别采取PCR法、ELISA法进行检测,并比较其对麻疹病毒的检测结果,现报道如下。



  1 资料与方法
  1.1 一般资料
  方便选取该疾控中心接到各辖区内上报的160例疑似麻疹病例作为研究对象,其中,男性92例,女性68例,年龄分布于5~12岁,平均年龄为(8.75±3.16)岁,均出现发热、出疹症状,均在出疹14 d内送院就诊,且由医院将其病情上报至该本疾控中心。在接受检测前,所有病例均对检测方法和目的进行详细了解,积极配合咽拭子、血液标本采集。
  1.2 方法
  所有病例均采集咽拭子、血液标本送检,咽拭子采取PCR检验,先采用无菌棉签对病例咽部分泌物进行采集,将咽拭子置于病毒标本保存液中,根据麻疹病毒RNA试剂盒说明书对RNA进行提取,待其反应体系完成配置后,在ABI 7500荧光定量PCR仪下进行扩增,再进行逆转录、预变性、变性、退火、延伸等操作,再收集荧光信号;血液标本采取ELISA法检验,先采用注射器于病例肘静脉抽取3 mL静脉血液,在4℃下对血液标本进行持续10 min的离心处理,离心速度为3 000 r/min,待血清分离后取血清,按照麻疹病毒ELISA法IgM抗体检测试剂盒说明书进行检测,在Bio-Tek ELX 808酶标仪下对450 nm处的吸光度值进行计算。
  1.3 观察指标
  比较两种方法对麻疹病毒的检测结果(发病后4 d内、发病4 d后ELISA、PCR对麻疹病毒的阳性检出率)。
  1.4 统计方法
  采用SPSS 19.0统计学软件处理数据,计数资料进行χ2检验,表现形式为例(n)、百分比(%), P<0.05为差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 检测时间分析
  PCR检测共检出111例阳性,ELISA共检出95例阳性,ELISA法检验结果为阴性而PCR检验为阳性的病例中,其检测时间多分布于发病后1~4 d内,发病4 d内ELISA检验阴性而PCR检验阳性共有17例,发病4 d后ELISA检验阴性而PCR检验阳性共有3例;PCR检测阴性而ELISA检测阳性共有4例,发病4 d内3例,发病4 d后1例。
  2.2 两种检验方法对麻疹病毒的检测结果比较
  160例疑似麻疹病例中,经两种方法检测后排除23例风疹病毒阳性病例,以减少风疹病毒对麻疹病毒检测结果的干扰。剩余137例病例中,发病后4 d内,共有71例病例接受检测,PCR检验对麻疹病毒的阳性检出率明显高于ELISA法检验(P<0.05);而在发病4 d后,共有66例病例接受检测,PCR检验对麻疹病毒的阳性检出率与ELISA法检验比较差异无统计学意义(P>0.05)。
  3 讨论
  麻疹病毒是一种球形病毒,在外界环境中的存活能力较弱,容易因高温、干燥、太阳直射而失去抵抗力,但其对寒冷的耐受度较高,因此,麻疹病毒多在冬春季节分散传播。麻疹病毒是麻疹的病原体,而麻疹属于儿童期常见呼吸系统传染病,具有较强的传染性,临床表现为皮丘疹、发热、呼吸道症状等,通常情况下,如小儿患者未出现并发症,其预后相对较好,而一旦出现并发症,很可能会导致小儿患者死亡,因此,需对麻疹进行有效预防[3-4]。
  我国将麻疹病毒感染列为早期计划免疫接种任务,通过接种麻疹疫苗可在一定程度上预防麻疹的发生,但也有部分儿童仍会发生麻疹,而由于麻疹的传染性较强,因此,需在早期进行诊断和治疗,以减少大面积疫情暴发。由于麻疹病毒与风疹病毒较为相似,其引发的感染症状也较为相似[5-6],因此,临床上在早期诊断麻疹时容易与风疹混淆,对其治疗十分不利。
  在麻疹早期诊断中,特异性的IgM抗体检测可对麻疹病毒诊断起到辅助诊断作用,我国现阶段的麻疹病毒诊断多采用ELISA法对血清中的特异性IgM抗体进行检测,但在实际工作中,这种检测方法的早期阳性检出率并不高,存在漏诊[7]。近年来,临床上针对病毒等病原微生物的检测逐渐开始应用聚合酶链反应检测,聚合酶链反应是一种新型的快速检测技术,对病毒核酸具有较高的灵敏性和特异性[8]。该研究为探讨聚合酶链反应检测对麻疹病毒的检验效果,对160例疑似麻疹病例进行研究后发现,160例疑似麻疹病例中,经两种方法检测后排除23例风疹病毒阳性病例,剩余137例病例中,发病后4 d内,PCR检验对麻疹病毒的阳性检出率明显高于ELISA法检验(P<0.05),而在发病4 d后,PCR检验对麻疹病毒的阳性检出率与ELISA法检验比较差异无统计学意义(P>0.05),同时,该研究还发现,ELISA法检验结果为阴性而PCR检验为阳性的病例中,其检测时间多分布于发病后1~4 d内,这提示该研究聚合酶链反应在麻疹病毒早期感染阶段的检出效果较好,其阳性检出率高于ELISA法。该研究结果与褚文达[9]的研究报道结果相对一致,证实了该研究的可靠性,在褚文达的研究中,在发病后4 d内对疑似麻疹患者进行血液、咽拭子采样和检测,研究发现,ELISA法检测阳性率不及PCR法,其阳性检出率分别为37.04%、59.26%,且发现ELISA法检出阴性而PCR检出阳性的标本多分布于发病后1~5 d内(发病后第1、2、3、4、5、6、7天分别占比17.31%、11.54%、25.00%、17.31%、17.31%、7.69%、3.85%),说明PCR法可对麻疹病毒进行快速有效检测,尤其是对出疹早期麻疹病毒,可减少因ELISA法的漏诊。这可能与麻疹病毒的分布有关,ELISA检测的主体为血液标本,而聚合酶链反应检测的主体为咽拭子,麻疹病毒主要分布与呼吸道中,在早期阶段,咽部分泌物中的麻疹病毒分布较多,而在后期,麻疹病毒可能会逐渐进入血液,故后期阶段ELISA法的阳性检出率与PCR法接近。
  综上所述,在麻疹病毒的病原学检测中,PCR检验可对早期麻疹患者进行诊断,还可对早期ELISA法诊断为阴性的患者进一步诊断,可有效减少漏诊,具有较高的辅助诊断价值。
  [参考文献]
  [1] 徐军,赵晓,侯存军,等.麻疹的实验室诊断研究进展[J].中华实验和临床感染病杂志:电子版,2016,10(3):261-264.
  [2] 孔祥军,申镇维,何继红,等.麻疹病毒、风疹病毒和腮腺炎病毒多重RT-PCR法的建立[J].临床检验杂志,2013,31(6):409-411.
  [3] Ammour Y,Faizuloev E,Borisova T,et al.Quantification of measles, mumps and rubella viruses using real-time quantitative TaqMan-based RT-PCR assay[J].Journal of Virological Methods,2013,187(1):57-64.
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  [5] Sheikhakbari S,Mokhtari-Azad T,Salimi V,et al.The Use of Oral Fluid Samples Spotted on Filter Paper for the Detection of Measles Virus Using Nested RT-PCR[J].Journal of clinical laboratory analysis,2012,26(3):215-222.
  [6] 陳玲霞,姬莉莉,孙建飞,等.麻疹实验室诊断中ELISA法和实时荧光定量RT-PCR法的比较[J].实用预防医学,2016, 23(1):106-108.
  [7] 侯存军,陈洪晓,柳君如,等.麻疹实验室诊断中病毒抗原与RNA检测的对比研究[J].中华实验和临床感染病杂志:电子版,2014,7(3):349-351.
  [8] 顾文珍,朱莹莹,倪红霞,等.宁波地区2014年麻疹流行情况及病毒基因型分析[J].国际流行病学传染病学杂志,2016,43(4):254-257.
  [9] 褚文达.ELISA法和RT-PCR法在麻疹病毒检测中的应用比较分析[J].标记免疫分析与临床,2016,23(11):1352-1354.

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