制作脂肪组织常规切片方法的改良及临床价值

发表时间:2017/12/15   来源:《临床医学教育》2017年11月   作者:曹康
[导读] 脂肪组织是由大量的脂肪细胞构成的,由于其结构比较特殊,同时其还具有很多的油脂成分,所有在制片上,比其他的组织更为困难,特别是在术中冷冻的时候

苏州工业园区星海医院 江苏苏州 215021
       【摘要】目的:探讨常规切片的方法改良后,其制片质量在临床中的运用价值。方法:选取我院(2010年1月~2017年6月)存档的65例脂肪组织标本为研究对象,材料为常规组织处理后难以切片的脂肪瘤蜡块;冷冻切片为43例脂肪源性肿瘤,22例术中保乳手术标本。按照制片方法不同分为观察组与对照组,观察组33例,采用改良后的制片方法,对照组32例,采用常规制片方法,观察常规切片方法与改良方法后脂肪组织的制片情况和染色情况。结果:常规的切片方法和冷冻切片方法制作出的切片,脂肪细胞有重叠现象,乳腺组织周边的脂肪组织也有破碎、重叠情况;而改良切片方法后,细胞平整,厚薄均匀,没有出现重叠现象,同时乳腺组织周边的脂肪组织镜下细胞平整,厚薄均匀,没有出现重叠情况。结论:脂肪组织常规切片方法经改良后,能使切片细胞平整,厚薄均匀,无重叠现象,有效提高制片质量。
       【关键词】脂肪组织;切片改良;临床价值
        脂肪组织是由大量的脂肪细胞构成的,由于其结构比较特殊,同时其还具有很多的油脂成分,所有在制片上,比其他的组织更为困难,特别是在术中冷冻的时候[1]。另外很多病理科在脱腊时也没注意组织的不同,导致切片有大量的空洞、破碎,很难切片,所以,脂肪组织已经被归类为不合适在术中进行活检的一种组织[2]。但实际的手术过程中,又不可避免的会出现脂肪组织,因此不可以逃避这个过程,为了提高脂肪切片的质量,本文结合作者本人在实际工作中的探索发现,对制作脂肪组织常规切片方法进行改良,改进了很多方面,提高了脂肪组织制片质量,报道如下。
        1 资料与方法
        1.1 一般资料
        选取我院(2010年1月~2017年6月)存档的65例脂肪组织标本为研究对象,材料为常规组织处理后难以切片的脂肪瘤蜡块;冷冻切片为43例脂肪源性肿瘤,22例术中保乳手术标本;冷冻切片机选用德国Leica,型号:RM2235。按照制片方法不同分为改良切片组与常规切片组,改良切片组33例,采用改良后的制片方法,常规切片组32例,采用常规制片方法,两组标本相比无明显差异,无统计学意义(P>0.05),可进行对比。
        1.2 方法
        对照组采用常规进行处理,正常切片和制片;观察组采用改良后的制片方法如下:(1)首先将包埋后的脂肪组织粗修一下,到最大切面即可,然后将其放入冷冻箱里面1-2h,温度保持在零下20℃;(2)取出腊块后立即放于Leica冷冻切片机上,然后沿着先前的粗修方向进行切片,厚度保持在6~8μm;(3)切好后放入温水中展开,温度大约40℃,不能放入乙醇中展片,在裱片以及后面捞片的时候都需要快速,最后进行烤片、脱蜡、染色、封固等常规工作。冷冻切片:(1)按照常规的冷冻剂包埋方法进行包埋,温度保持在零下22℃,完成速冻后首先将脂肪组织进行粗修,暴露其最大面;(2)如冷冻机为双压缩,则开始就将稳温度下降至零下40℃,在粗修完成后需将组织放置5~10min;(3)然后顺着粗修的方向使用Leica冷冻切片机迅速切片,一般情况下这种切片都会有弯曲现象,这时可以利用干净的毛笔来帮助扫平,最后进行染色、封固等常规工作[3]。如果是单压机,须将组织重新放入速冻台,速冻5~10min后,再把厚度调整到10~14μm,后续操作也同上。
        1.3 观察指标
        观察常规切片方法与改良方法后脂肪组织的制片情况和染色情况。
        2 结果
        常规的切片方法和冷冻切片方法制作出的切片,脂肪细胞出现了重叠现象,乳腺组织周边的脂肪组织也有重叠、破碎情况,见图1、2;而改良切片方法后,厚薄均匀,细胞平整,无重叠现象,同时乳腺组织周边的脂肪组织镜下厚薄均匀,细胞平整,没有出现重叠情况,见图3、4。    

   
        3 讨论
        脂肪组织是由大量的脂肪细胞构成的,而其细胞内有聚满脂肪滴,同时有由于其结构比较特殊,所以在常规的脂肪组织制片中,那些试剂很难渗透入其中。同时如果脱水液在很长时间内没有进行更换,很容易导致脂肪组织浸腊、脱水、固定不足,由于包埋组织太过柔软,在切片就容易将其切出空洞,破碎等,很难切片。但实际工作中又需要对其进行切片。所以对制作脂肪组织常规切片的方法加以改良很有必要。熊红梅[4]等人为了提高脂肪组织的切片质量,在日常工作中不断探索,在常规的方法上做了很大的改进,结果制作出的切片无细胞重叠、厚薄完整、切片完整。本研究在脂肪组织常规切片的方法上进行改良,结果改良切片方法后,细胞平整,厚薄很均匀,没有出现重叠现象,同时乳腺组织周边的脂肪组织镜下细胞平整,厚薄很均匀,没有出现重叠情况,与文献研究结果相似。
        在实际的工作中,脂肪组织腊块一般都很少,所以一般会将其集中了再处理。而在常规的制片方法中,成批的修切法通常是使用冷台和冰盘来冷冻脂肪腊块,但一般冰盘达不到需要的温度,另外冷台的温度也在零下5℃左右,这种方法不仅延长了冷冻时间,还加厚了切片厚度。虽然这样的切片会更完整,但是由于其在切片机上停留时间的延长,也会导致组织变软,不利于切片,切出来也不够完整,只有前面几张会较为完整。而本研究,将常规切片方法进行改良,首先将腊块进行粗修,然后将其放入零下20℃的冷冻箱里面1-2h,这里就将常规的冷冻时间延长了30~80min,凝固了脂质,更利于切片。
        冷冻切片是通过低温,让组织标本内的水分形成小冰晶,由于小冰晶很多,众多小冰晶集合在一起就会增加整个组织标本的硬度,在切片时能更好的切片[5]。但是脂肪大多是由脂肪细胞构成的,只有少部分的结缔组织,而脂肪细胞又是由脂滴组成,所以其含水量少到可以忽略不计,而虽然结缔组织具有水分,但也很稀少,所以对于脂肪组织来说,很难对其进行冰冻僵硬。一般的组织标本,在零下20℃左右之时就变得僵硬,很利于切片,切片也很完整,但是脂肪标本,即使处于零下20℃,也会是柔软的,对于镜检的要求很不符合,就算处于零下30~40℃其按照以往的方法也很难进行切片,易空洞,破碎。为了更好的切片,作者先将脂肪组织放入零下22℃的速冻台进行速冻,变硬后快速取出进行粗修,然后又迅速将其放入速冻台进行速冻,然后在增加切片厚度的同时进行切片,此时的切片就很完整均匀,是理想的切片。
        另外作者认为在进行切片的时候还需要注意以下几点:(1)由于脂肪组织油脂过多,所以冷冻时间应该延长;(2)脂肪组织蜡切片和冷冻切片都不能太薄、太厚,最好是腊切片6~8μm,冷冻切片10~14μm;(3)再用冷冻切片机进行切片时,需要快速切片,以避免细胞堆积;(5)切片时应观察原来的粗修方向,切片时也跟着粗修的方向进行。
        综上所述,脂肪组织常规切片方法经改良后,能使切片细胞平整,厚薄均匀,无重叠现象,有效提高制片质量,值得推广运用。
参考文献
[1]丁亚云.制作脂肪组织常规切片方法的改良[J].中国血液流变学杂志,2016,26(2):238-238.
[2]肖栩,郑芳,付先利,等.制作脂肪组织冷冻切片的体会[J].临床与实验病理学杂志, 2016,32(2):231-231.
[3]潘超,王灿铭.制作脂肪组织冷冻切片方法的改良[J].医药前沿,2014(30):370-370.
[4]熊红梅,邱晓明.脂肪组织切片方法的改良及应用体会[J].诊断病理学杂志,2015,22(6):375-375.
[5]杨世峰.脂肪组织恒低温冷冻切片方法的改进[J].解剖学杂志,2010,33(6):711-711.

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