sflt-1、VEGF、NF-B p65与EMs发生发展的相关性研究

发表时间:2017/9/22   来源:《中国误诊学杂志》2017年第13期   作者:王亚男
[导读] 子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的发生发展,会导致患者卵巢、输卵管等的破坏,促进患者盆腔慢性疾病的发生。

湖南省妇幼保健院  湖南长沙  410008
  摘要:目的 探讨可溶性血管内皮生长因子受体1(sflt-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、核转录因子B(NF-B)p65与子宫内膜异位症(EMs)的关系。方法 选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例(病例组),同时选取正常生育期妇女共60例作为对照组,测定两组血清sflt-1和VEGF水平,同时采用免疫组化法检测EMs患者内膜组织NF-B p65表达。结果 病例组血清sflt-1和VEGF分别为(301.40±84.26)pg/ml和(430.11±98.46)pg/ml,明显高于对照组(p<0.05);r-AFS分期为Ⅲ~Ⅳ期患者血清sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达分别为(345.35±90.13)pg/ml、(486.70±99.13)pg/ml和(0.814±0.110),明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者(p<0.05);sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期呈正相关(rs=0.633、0.801和0.563,p<0.05);内膜组织NF-B p65表达与患者血清sflt-1和VEGF无相关性(p>0.05)。结论 血清sflt-1、VEGF水平以及内膜组织NF-B p65表达与EMs发生发展有一定的关系,值得进一步研究。
  关键词:可溶性血管内皮生长因子受体1;血管内皮生长因子;核转录因子B;子宫内膜异位症
  The relationship between sflt-1,VEGF,NF- B p65 and the development of EMs
  [Abstract]Objective:To investigate relationship between soluble vascular endothelial growth factor receptor 1(sflt-1),vascular endothelial growth factor(VEGF),nuclear transcription factor B(NF- B)p65 and endometriosis(EMs). Methods:Selected 60 cases of EMs patients in our hospital from February 2015 to October 2016,and 60 women with normal growth period as control group,ELISA was used to detect serum sFlt-1 and VEGF levels,immunohistochemistry was used to detect the endometrial tissue NF- B p65 expression of patients with EMs. Results:The serum levels of sFlt-1 and VEGF in the case group were(301.40±84.26)pg/ml and(430.11±98.46)pg/ml,significantly higher than those in the control group(P < 0.05);r-AFS stage III ~ IV patients serum sFlt-1,VEGF and endometrial tissues NF- B p65 were(345.35 ±90.13)pg/ml,(486.70±99.13)pg/ml and(0.814±0.110),were significantly higher than that in stage I-II patients(P < 0.05);sFlt-1,VEGF and endometrial tissue NF- B p65 expression was positively correlated with r-AFS(rs=0.633,0.801 and 0.563,P<0.05);Endometrial tissue NF-B p65 expression had no correlation with serum sFlt-1 and VEGF(P > 0.05). Conclusion:There is a certain relationship between the serum sFlt-1,VEGF and endometrial tissue NF-B p65expression and the development of EMs,worth further study.
  [Key words] Soluble vascular endothelial growth factor receptor 1;vascular endothelial growth factor;nuclear transcription factor B;endometriosis
  
  
  子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)的发生发展,会导致患者卵巢、输卵管等的破坏,促进患者盆腔慢性疾病的发生。流行病学研究表明,EMS的发病率可达0.7%以上[1]。其中中度或者重度EMs的发生可导致更为严重的临床预后。基础领域的相关研究显示,趋化因子或者生长因子家族相关成员的异常表达,可以通过加剧氧化应激损伤,促进EMs患者异位病灶的侵袭或者临近正常组织的破坏等,促进EMs的发生发展[2-4]。为了进一步揭示EMs的发病机制,为临床上EMs的预后评估提供理论参考,本研究选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例,探讨了血清中内皮生长因子受体1(soluble vascular endothelial growth factor receptor 1,sflt-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、核转录因子B(nuclear transcription factor B,NF-B)的表达,及其与患者临床分期的关系。
  1资料与方法
  1.1一般资料
  选取2015年2月至2016年10月在我院治疗的EMs患者60例(病例组),纳入标准:(1)均经病理学确诊;(2)入院前3个月为接受过激素类药物治疗;(3)患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准:有子宫息肉、子宫内膜非典型性增生等妇科器质性疾病。同时选取正常生育期妇女共60例作为对照组,两组受试者年龄、月经周期、产次等一般资料比较差异无统计学意义(p>0.05),见表1。
  

  1.2检测方法
  血清sflt-1和VEGF等的检测:入院后24小时内常规采集患者肘部静脉血3ml,加入抗凝剂2ml,1000rmin离心(离心半径10cm)5min,采用生物酶联免疫吸附实验检测相关指标,sflt-1和VEGF检测试剂盒购自罗氏生物检测应用公司,配套试剂及仪器购自南京伯斯金生物科技有限公司。
  内膜组织中NF-B p65等的表达的检测:采用石蜡切片脱蜡至水,切片厚度3mm,3%H 2O2 室温孵育 5 min,采用去离子水冲洗3次,每次3min,采用浓度为10% 牛奶蛋白(1g蛋白加入100ml纯水)封闭,室温孵育 5min,加入抗体(鼠来源,南京碧云天生物科技有限公司),37 ℃ 孵育 2h,PBS缓冲液冲洗3次,每次5min,滴加HRP标记的二抗(兔来源,购自罗氏检测公司),37 ℃ 孵育 30 min,PBS 冲洗3次,每次5min,加入 NBT/BCIP色剂显色 5min,复染,脱水,透明,封片,镜下观察。OLIPICS电子显微镜购自上海精密仪器有限公司,配套试剂购自南京泰康生物科技有限公司。
  1.3 r-AFS分期
  对EMs患者进行r-AFS分期,内容包括对患者异位病灶和粘连范围进行评分,其中Ⅰ期为1~5分,Ⅱ期为6~15分,Ⅲ期为16~40分,Ⅳ期为>40分,分数越高表面患者症状越重。
  1.4统计学处理
  采用SPSS19.0进行统计分析,计量资料采用(±s)表示,两组间比较采用t检验;相关性采用Spearman相关或Pearson相关分析。以p<0.05表示差异具有统计学意义。
  2结果
  2.1 两组血清sflt-1及 VEGF比较
  病例组血清sflt-1和VEGF明显高于对照组,差异比较有统计学意义(p<0.05),见表2。
  

  2.3 相关分析
  EMs患者血清sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期进行Spearman相关分析,结果显示sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期呈正相关(rs=0.633、0.801和0.563,p<0.05);内膜组织NF-B p65表达与患者血清sflt-1和VEGF无相关性(p>0.05)。
  3.讨论
  自身性激素敏感性的改变,或由于多次的人工机械性操作损伤病史等,均可促进EMs的发生,特别是在具有慢性盆腔炎症性疾病或者卵巢囊肿的人群中,EMs的发病率更高,可较正常对照人群上升25%-55%[5]。EMs的发生可以在下列方面影响到患者的生存预后[6,7]:(1)EMs破坏了卵巢上皮生发层,其对于卵母细胞或者生发细胞的破坏,可以加剧卵巢功能的衰退;(2)中度或者重度的EMs患者,其盆腔特别是后腹膜、直肠及膀胱的粘连较为严重,长期的慢性盆腔疼痛严重影响到了患者的生活质量。一项汇集了324例中度EMs患者的临床治疗随访研究显示,EMs治疗后的总体有效率不高,病情复发率可达25%以上,且患者的自主性疼痛感受等并无明显改善。而通过对EMs发病过程中相关生物学机制的研究,一方面可以为EMs的综合性生物治疗提供靶点,同时可以为如何降低EMs治疗后的复发率提供参考。
  VEGF是血管内皮生长因子家族成员,其对于血管内皮细胞受体sflt-1的高特异度的结合作用,可以促进子宫内膜异位症病灶组织中细胞的高血流灌注,提高了病灶细胞的侵袭能力,促进了子宫内膜腺体等间质成分对于卵巢或者输卵管的浸润[8,9];NF-B介导的信号通路,能够在影响炎症因子的表达、诱导局部氧化应激反应等方面发挥作用,NF-B的表达上调在影响异位症病灶细胞微环境的基础上,促进了EMs的盆腔组织的破坏[10,11]。
  本次研究发现,EMs患者血清中的sflt-1和VEGF等指标均明显高于正常对照人群,上升幅度较为明显,提示sflt-1和VEGF可能参与到了EMs的发生发展过程中,sflt-1和VEGF等的上升能够影响到异位症病灶中子宫内膜腺体细胞的侵袭活力,增加内异症病灶组织中的炎症性因子的表达,促进患者病灶对于腹膜上皮或者其他盆腔正常组织的浸润。孙莹等[12,13]研究者在探讨EMs患者血清中相关趋化因子或者生长因子表达的过程中发现,重度EMs患者的血清中VEGF可平均上升25%-65%,且患者的病程越长、临床分期越晚,VEGF的表达越高,患者的临床预后越差。在探讨不同的r-AFS分期患者血清中相关因子表达的过程中,可以明显地发现r-AFS分期越高,VEGF或者sflt-1的表达越高,趋势较为明显,提示sflt-1和VEGF与子宫内膜异位症患者的病情具有较为密切的关系,从机制上考虑sflt-1和VEGF促进患者r-AFS分期进展的原因,考虑可能与下列因素有关:(1)sflt-1可以通过诱导子宫内膜异位症腺体细胞的异常分化,导致其对于盆腔组织的破坏出血、子宫直肠陷凹的粘连等病理过程持续性进展;(2)VEGF的上升,能够影响到新生血管的形成,促进异位症病灶组织细胞的血流供应,加剧病灶的增殖活性。但需要注意的是,陆丹等[14]研究者的研究中并未发现VEGF在不同临床分期或者r-AFS分期中的表达差异,这与本研究的结论存在一定的差别,考虑到子宫内膜异位症患者的病情差异、入组患者的血清学检测方法的不统一等,均可能导致了相关结论的差异。最后,本研究发现sflt-1、VEGF以及内膜组织NF-B p65表达与r-AFS分期呈正相关,相关性较为明显,进一步提示了sflt-1和VEGF与患者病情的关系。
  综上所述,血清sflt-1、VEGF水平以及内膜组织NF-B p65表达与EMs发生发展有一定的关系,相关生物学因子的表达与患者病情的关系研究,可以为后续临床治疗提供新的思路。
  
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