刺五加治疗急性重症胰腺炎的实验研究

发表时间:2017/9/15   来源:《临床医学教育》2017年8月   作者:王琳
[导读] 急性胰腺炎是以胰腺水肿、出血坏死、炎性细胞浸润为特征的胰腺炎性疾病,常伴有全身各系统的炎症反应综合征以及多器官功能衰竭,病死率高达20%- 30%。

唐山市丰南区医院  河北省唐山市 063300
       【摘要】 目的 探讨刺五加对大鼠急性重症胰腺炎的治疗作用及其机制。方法  60只SD大鼠随机分为假手术组、急性重症胰腺炎12h组、急性重症胰腺炎24h组、刺五加治疗12h组和刺五加治疗24h组,每组12只。以L-精氨酸注射法制作大鼠急性重症胰腺炎模型,治疗组大鼠在制模成功后给予刺五加治疗,每天一次。分别在实验12h和24h后采集标本,比较不同组大鼠胰腺组织HE染色结果、血清淀粉酶水平和TNF-α水平。结果  急性重症胰腺炎组和刺五加治疗组大鼠血清淀粉酶水平和TNF-α水平均显著高于假手术组,差别有统计学意义(P<0.05)。刺五加治疗12h组和24h组大鼠血清淀粉酶水平(治疗12h组vs急性重症胰腺炎12h组:733.74±153.45 U/L vs 856.52±183.55 U/L,治疗24h组vs急性重症胰腺炎24h组:883.75±143.25 U/L vs 1031.94±146.59 U/L)和TNF-α水平(治疗12h组vs急性重症胰腺炎12h组:58.65±8.94 pg/mL vs 72.32±11.65 pg/mL,治疗24h组vs急性重症胰腺炎24h组:109.31±123.65 pg/mL vs 155.79±17.49 pg/mL)均低于同期未治疗组大鼠,差别有统计学意义(P<0.05)。结论  刺五加可通过降低急性重症胰腺炎大鼠的血清淀粉酶水平和TNF-α水平发挥治疗作用。
       【关键词】 刺五加  急性重症胰腺炎  淀粉酶  TNF-α
        Abstract Objective: To investigate the effect of acanthopanax on severe acute pancreatitis (SAP) in rats. Methods: 60 SD rats were randomly divided into sham operation group (n=12), SAP for 12h group (n=12), SAP for 24h group (n=12), acanthopanax treatment for 12h group (n=12)and acanthopanax treatment for 24h group (n=12). L-aginine injection method was used to manufacture SAP model in rats. Acanthopanax was used to treat SAP for 12h and 24h in rats. Compare the pathological change of pancreatic tissue, serum amylase level and TNF-α level among different groups in rats. Results: Serum amylase level and TNF-α level in rats of SAP groups and acanthopanax treatment groups were significantly higher than those in rats of sham operation group (P<0.05). Serum amylase level (acanthopanax treatment for 12h group vs SAP 12h group:733.74±153.45 U/L vs 856.52±183.55 U/L,acanthopanax treatment for 24h group vs SAP 24h group:883.75±143.25 U/L vs 1031.94±146.59 U/L) and TNF-α level (acanthopanax treatment for 12h group vs SAP 12h group:58.65±8.94 pg/mL vs 72.32±11.65 pg/mL, acanthopanax treatment for 24h group vs SAP 24h group:109.31±123.65 pg/mL vs 155.79±17.49 pg/mL) in rats of acanthopanax treatment for 12h group and acanthopanax treatment for 24hs group were respectively lower than those in rats of SAP groups, and all the difference were significantly ((P<0.05). Conclusion: Acanthopanax is effective in treating severe acute pancreatitis in rats by decreasing the level of serum amylase and TNF-α.
        Keyword: acanthopanax; severe acute pancreatitis; amylase; TNF-α
        急性胰腺炎是以胰腺水肿、出血坏死、炎性细胞浸润为特征的胰腺炎性疾病,常伴有全身各系统的炎症反应综合征以及多器官功能衰竭[1],病死率高达20%- 30%[2]。因此,如何有效治疗急性重症胰腺炎,防止并发症的发生是目前研究的重点。刺五加是一种含有多种成分的中药,具有抗氧化、清除氧自由基、改善微循环的作用[3],被广泛用于治疗心血管疾病。近年研究显示,刺五加可降低血清中TNF-α等多种炎症因子[4],其可能在急性重症胰腺炎过程中发挥一定的保护作用,但相关研究尚较少。本研究通过在急性重症胰腺炎大鼠中应用刺五加进行治疗,探讨刺五加对急性重症胰腺炎的治疗效果及其可能机制,为合理治疗急性重症胰腺炎提供科学依据。
        材料与方法
        1 实验动物来源
        健康纯种雄性Sprague-Dawley大鼠(购自北京市实验动物养殖中心)60只,年龄3-6个月,体重 300-350g,专门实验室饲养员统一饲养,隔日换垫料,室温温度保持 20-25℃。
        2 实验动物分组
        采用单纯随机分组方法,将实验动物随机分为假手术组、急性重症胰腺炎12h组、急性重症胰腺炎24h组、刺五加治疗12h组和刺五加治疗24h组。假手术组大鼠打开腹腔、翻动胰腺组织后关腹,同期给予生理盐水腹腔注射;其他4组大鼠均采用L-精氨酸腹腔注射法进行急性重症胰腺炎模型制备,刺五加治疗12h组和24h组大鼠在制备模型后给予刺五加腹腔注射进行治疗。
        3 急性重症胰腺炎模型制备 
采用L-精氨酸腹腔注射法进行急性重症胰腺炎模型制备。将L-精氨酸粉末(加拿大BBI公司,分析纯级)20g溶解于100ml 0.9%的氯化钠溶液中,搅拌,直至温度达到30℃左右,以氢氧化钠调整溶液pH值至7.0,配成20 %的L-精氨酸溶液。大鼠于制模前12h禁食水。将配制好的20%L-精氨酸溶液分2次腹腔内注射(2000mg/kg),每次间隔1h。
        4 刺五加治疗
刺五加治疗12h组和24h组大鼠均于术后5 min将刺五加注射液((1ml/100g,黑龙江省格润药业有限责任公司生产,批号:2014012606)通过股静脉给药1次。
        5 标本采集及处理
        假手术组于实验12h处死,急性重症胰腺炎组和治疗组大鼠分别在相应时相点(实验12h和24h)处死,采集静脉血,采用人工碘比色法测定血清淀粉酶。TNF-α水平测定采用ELISA法,试剂盒购自上海微蒙生命科技有限公司。
        处死大鼠经上腹正中切口入腹,观察胰腺大体变化,取体、尾部胰腺组织,石蜡包埋后连续切片,厚度约5µm,以经粘片剂处理过的载玻片捞片,晾干后置于60℃烤箱烘烤4小时后行HE染色,光镜下观察组织学改变。
        6 统计学方法
        采用SPSS17.0进行数据录入和统计分析。计量资料采用均数±标准差表示,多组间计量资料比较采用方差分析,组间两两比较采用SNK检验,P<0.05为差别有统计学意义。
        结  果
        1、不同组大鼠胰腺组织HE染色结果比较
        假手术组大鼠胰腺组织染色切片显示胰腺组织细胞结构完整,纹理清晰,腺泡细胞排列整齐,未见炎症细胞浸润及细胞破坏。急性重症胰腺炎12h组大鼠大体可见胰腺腺体增大、肥厚,呈暗紫色,坏死灶散在分布坏死较重;镜下见脂肪坏死,腺泡破坏较多,血管影较少,部分被消化,大片状出血,腺泡及小叶结构模糊不清。刺五加治疗12h组大鼠镜下见组织结构紊乱,纹理交错,腺泡细胞点状坏死,少量炎症细胞浸润(图1)。

 

        2、不同组大鼠血清淀粉酶和TNF-α水平测定
        急性重症胰腺炎12h组大鼠血清淀粉酶开始升高,24h则明显升高。刺五加治疗12h组和24h组大鼠血清淀粉酶水平均低于同期未治疗组大鼠,但高于假手术组大鼠,差别均具有统计学意义(表1)。
        急性重症胰腺炎组、刺五加治疗组大鼠血清TNF-α水平均显著高于假手术对照组,差别有统计学意义。刺五加治疗组大鼠TNF-α水平均低于同期未治疗组大鼠,差别有统计学意义。

        讨  论
        胰腺是人体仅次于肝脏的第2大外分泌器官,主要合成、贮存和分泌消化酶、淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶等。胰腺炎的发生可导致胰腺实质酶性破坏、蛋白溶解、血管壁坏死出血、局灶性脂肪坏死等病理变化,同时胰腺炎还可引起局部和全身性的炎症反应,最后导致严重的并发症,因此,如何预防和控制胰腺炎的发生发展是目前研究的热点和重点问题。
        血清淀粉酶水平是急性胰腺炎的重要诊断指标之一,其升高水平与胰腺损伤程度有一定的相关性[5]。本研究结果显示,急性重症胰腺炎12h组大鼠的血清淀粉酶水平开始升高,24h组大鼠血清淀粉酶处于高峰水平,这提示我们,急性重症胰腺炎在发病初期即胰腺损伤严重,应尽早、及时开始治疗。TNF-α主要来源于巨噬细胞,在急性胰腺炎中最早升高并起着重要作用的细胞因子,是预测胰腺炎预后较有价值的指标,其水平高低与胰腺炎的严重程度及并发症的发生率呈正相关[6]。本研究结果显示,急性重症胰腺炎组大鼠TNF-α水平在损伤12h和24h呈现持续增长趋势,且均高于假手术对照组,提示我们,降低TNF-α水平可能有助于减少胰腺炎并发症的发生。
        刺五加的主要成分为刺五加多糖和皂苷,已有研究显示,其具有抗炎、抗氧化、改善免疫调节等生物作用[7]。本研究采用刺五加进行治疗后,结果显示,治疗组大鼠血清淀粉酶水平和TNF-α水平均低于同期未治疗组大鼠,差别有统计学意义。HE染色结果也显示,治疗组大鼠胰腺组织充血程度和炎症细胞浸润程度好于未治疗组大鼠,进一步证实刺五加治疗可有效减轻细胞炎症反应,对胰腺发挥一定的保护作用。已有研究发现[8],刺五加可明显降低黏附分子的表达、降低微血管通透性、改善微循环障碍,进而减轻细胞损伤,此外,刺五加还可通过降低NF-kB mRNA表达水平,阻断胰腺炎过程中炎症介质的瀑布样级联反应,进而减少炎症因子的产生[9],这可在一定程度上解释本研究观察到的刺五加治疗可减少血清淀粉酶和TNF-α水平。
        综上所述,本研究结果表明,刺五加可通过抑制大鼠急性重症胰腺炎后血清淀粉酶和TNF-α水平,发挥治疗作用,提示在疾病早期应及时应用治疗,以降低炎症反应,减轻并发症的发生,进而降低死亡率。
参考文献
1. Malik AM. Acute pancreatitis. A more common and severe complication of gallstones in males[J]. Int J Health Sci ,2015,9(2):141-145.
2. 李力,黄玲,徐萍,等.重症急性胰腺炎预后危险因素分析[J].中华胰腺病杂志, 2015,15(3):150-153.
3. Zhang SN, Li XZ, Liu SM, et al. Metabonomic Study of the Effects of Acanthopanax senticosus on Peripheral System of Rats[J]. Planta Med, 2015,81(9):722-732.
4. 王瑞强,常晓强,温占勇. 刺五加水提物的抗急性炎症及免疫增强作用[J]. 天津中医药,2013,32(2):109-111.
5. 黄平,王波,杜治祥,等.空腹C肽、血尿淀粉酶检测对脓毒症继发胰腺功能损伤的诊断价值[J].中国临床研究,2015,28(5):659-660.
6. Perides G, Weiss ER, Michael ES, et al. TNF-alpha-dependent regulation of acute pancreatitis severity by Ly-6C(hi) monocytes in mice[J]. J Biol Chem, 2011,286(15): 13327-13335.
7. 卢芳,杨晓丹,井月娥,等. 基于代谢组学的刺五加多糖对大鼠心脏内源性物质代谢的影响[J]. 中药材,2015,38(5):1005-1009.
8. Fei XJ, Zhu LL, Xia LM, et al. Acanthopanax senticosus attenuates inflammation in lipopolysaccharide-induced acute lung injury by inhibiting the NF-κB pathway[J]. Genet Mol Res, 2014 13(4):10537-10544.
9.  Wu ZY, Zhang YB, Zhu KK, et al. Anti-inflammatory diterpenoids from the root bark of Acanthopanax gracilistylus[J]. J Nat Prod, 2014,77(11):2342-2351.

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