血液核酸扩增检测实验室室内质量控制方法探讨

发表时间:2017/6/23   来源:《健康世界》2017年第8期   作者:张子海 郭文成 胡巍巍 刘洋 张雪梅
[导读] 阻断部分因ELISA检测“窗口期”漏检而导致的输血传染病发生,从而降低输血传播性疾病风险,提高血液安全。

 鸡西市中心血站  黑龙江鸡西  158100
  摘要:目的 通过箱体图法及峰度法对统一数据进行离群值检验,探寻适合转录介导的扩增发使用的室内质控方法。方法 使用外部阳性标准物质,每日随当日血液筛查标本一同进行核酸单人份联检,对检测结果分别进行峰度法和箱体图法群值检验。结果 HBV DNA、HCV RNA外部标准物质经检测95次结果,采用峰度法离群值检验分别发生1次、4次和3次离群;采用箱体图法离群值检测分别发生2次、5次和3次离群;外部标准物质检测值离群时诺华内部质控系统未表现出异常。结论 使用外部标准物质进行室内质控,可以增强当批次实验结果的可靠性;且根据实验检测结果是否离群进行分析,推断实验过程是否发生微小变化,对实验质量体系的建立与提高具有重要意义。
  关键词:血液筛查;核酸检测;室内质控
  一、材料与方法
  1材料
  1.1主要仪器与试剂:厦门优迈科医学仪器有限公司提供的全自动核酸提取仪,采用WanTag-1.0核酸提取系统、ABI7500核酸扩增系统。北京万泰生物药业股份有限公司提供的乙型肝炎病毒  丙型肝炎病毒  人类免疫缺陷病毒1型核酸检测试剂盒,批号NT20150601,NT20160405,NT20160906。操作严格按照仪器、试剂说明书和本实验室SOP进行。
  1.2外部阳性标准物质
  1.2.1外部标准物质的选择:参照ELISA试验中尽可能选定室内质控品浓度接近检出限的原则,HBV DNA含量至少为检出限的5倍,HIV RNA和HCV RNA含量至少为检出限的3~4倍.试剂说明书提供数据显示HBV DNA项目95%检出限为10.4IU/ml,HCVRNA项目95%检出限为3.0IU/ml,HIV RNA项目95%检出限为45IU/ml,同时考虑影响外部标准物质运输途中的冷链保证、长时间保存、不同核酸的降解速度和易降解程度等因素后,选择HBV DNA外部标准物质浓度为50IU/ml、HCV RNA外部标准物质浓度为50IU/ml、HIV RNA外部标准物质浓度为200IU/ml。
  1.2.2外部标准物质来源、批号及浓度:购自康彻斯坦生物,标准物质浓度选择及批号为:HBVDNA浓度50IU/ml,批号20151102,HCV RNA浓度50IU/ml,批号20151102,HIV RNA浓度200IU/ml,批号20151102。
  1.3 北京万泰生物药业公司核酸检测质控品及校准品
  1.4室内质控数据来源:2015年11月~2017年4月血液核酸筛查的室内质控外部阳性标准物质检测数据,包括HBV DNA、HCV RNA以及HIVRNA阳性标准物质检测数据。
  2、方法
  2.1外部阳性标准物质每日随当日血液筛查标本一同进行核酸单人份联检,每日检测一套3个项目的外部标准物质。
  2.2汇总检测数据,剔除离群值后,计算每个项目阳性标准物质检测值的均值、标准差和变异系数。
  2.3数据统计:箱体图法使用。


SPSS17.0软件包,计算数据上四分位数(Q3),下四分位数(Q1)和四分位距(IQR),IQR=Q3-Q1;绘制箱体图判定离群值或通过计算判定离群值:当检测值X>Q3+1.5×IQR或X<Q1-1.5×IQR时判定为离群。峰度法根据公式,计算bk后查界值表,找出离群值。
  3、结果
  3.1箱体图法结果
  HBV DNA项目根据北京万泰生物药业公司说明书提供的试剂HBV DNA95%检出限为10.4IU/ml,室内质控外部标准物质浓度为50IU/ml,结果显示在95次检测中有2次检测值为离群值,剔除离群值后检测均值为14.07,CV为7.04%.HCV RNA项目根据北京万泰生物药业公司说明书提供的试剂HCV RNA95%检出限为3.0IU/ml,室内质控外部标准物质浓度为50IU/ml,结果显示在95次检测中有5次检测值为离群值,剔除离群值后检测均值为7.78,CV为7.58%.HIV RNA项目根据北京万泰生物药业公司说明书提供的试剂HIV RNA95%检出限为45IU/ml,室内质控外部标准物质浓度为200IU/ml,结果显示在95次检测中有3次检测值为离群值,剔除离群值后检测均值为16.46,CV为8.14%。HBV DNA外部标准物质检测值X>16.815或X<11.215即为离群,HCV RNA外部标准物质检测值X>9.36或X<6.28即为离群,HIV RNA外部标准物质检测值X>20.05或X<12.925即为离群。
  3.2峰度法结果
  HBV DNA项目95个质控值计算bk=18.64>b(1-α)(α=0.05),提示存在离群值,剔除最远的值23.13后,对剩下的质控值进行峰度检验,bk=2.88<b(1-α)(α=0.05),提示未发现离群值;HCV RNA项目185个质控值计算bk=30.12>b(1-α)(α=0.05),提示存在离群值,剔除最远的值21.91后,对剩下的质控值进行峰度检验,bk仍>b(1-α)(α=0.05),提示仍然存在离群值,继续剔除,剔除后再次进行峰度检验,直至将离群值21.91、21.68、21.56、20.69、20.06、14.3全部剔除后,再次对剩下的质控值进行峰度检验时bk=2.75<b(1-α)(α=0.05),提示未发现离群值。
  HIV RNA项目95个质控值计算bk=3.14>b(1-α)(α=0.05),提示存在离群值,剔除最远的值20.49后,对剩下的质控值进行峰度检验,bk仍>b(1-α)(α=0.05),提示仍然存在离群值,继续剔除,剔除后再次进行峰度检验,直至将离群值20.49、12.46、20.1全部剔除后,再次对剩下的质控值进行峰度检验时bk=2.97<b(1-α)(α=0.05),提示未发现离群值。
  4、讨论
  我国血站血液检测大部分采用ELISA方法,采用2种不同试剂平行检测2次,由于方法学的固有缺陷,检测“窗口期”长,风险相对较高。根据国内外相关文献报道,应用NAT法检测血液标本可以进一步缩短检测窗口期,阻断部分因ELISA检测“窗口期”漏检而导致的输血传染病发生,从而降低输血传播性疾病风险,提高血液安全。
  参考文献:
  [1]任芙蓉.血液病毒核酸筛查的研究进展[J].中国输血杂志,2008,21(11):890-892.
  [2]吴亚玲,祝宏,董杰;血液核酸筛查室内质控品浓度选择的探讨[J].中国输血志,2013,26(2):170-171.
  [3 ]GB/T 4883-2008.数据的统计处理和解释正态样本离群值的判断和处理.

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