门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者基因分型和HBV P区耐药突变检测研究

发表时间:2014-7-9   来源:《中外健康文摘》2014年第1期供稿   作者:卢红梅
[导读] 耐药性是乙肝病毒拮抗抗病毒药物发生的基因改变,病毒耐药性的产生会严重影响治疗效果。
卢红梅
  (辽宁省丹东市传染病医院  118002)
  【摘要】目的:分析门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者在基因分型、HBV P区耐药突变方面的区别。方法:选取120例乙肝患者作为研究对象,其中60例有过拉米夫定治疗史,纳入A组,60例未接受过拉米夫定治疗,纳入B组,对两组患者的HBVP区耐药突点、HBV分型进行检测、比较。结果:两组患者的HBV基因分型(B型、C型、D型、其他型)比较,差异均不具有统计学意义,P>0.05;A组中,有26例的突变株存在于拉米夫定位点,占43.3%,B组有6例的突变株存在于拉米夫定位点,占10.0%,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:接受过拉米夫定治疗的乙肝患者,多存在拉米夫定耐药株,未接受过治疗的乙肝患者也需实施耐药检测,以便为临床诊断、治疗提供指导依据。
  【关键词】HBVP区   耐药突变点   拉米夫定   乙肝
  【中图分类号】R512.6+2                          【文献标识码】A                               【文章编号】1672-5085(2014)01-0156-02
  乙肝是临床常见病、多发病,全球范围内的乙肝感染者数量高达3.5亿,每年约有100万人因肝功能衰竭、肝硬化、肝癌死亡[1]。为探讨门诊乙肝患者和经拉米夫定治疗后乙肝患者在基因分型、HBVP区耐药突变方面的区别,本研究分别对未接受治疗和接受拉米夫定治疗的乙肝患者进行了HBVP区耐药突点、HBV分型,现报道如下。
  1   一般资料与方法
  1.1 一般资料
  选取我院在2011年10月~2013年10月收治的120例乙肝患者作为研究对象,所有患者均符合《病毒性肝炎防治指南》中的乙肝诊断标准,其中男性58例、女性62例,年龄在17~66岁之间,平均(37.3±2.3)岁。其中60例为接受过拉米夫定治疗的住院患者,纳入A组,60例为未接受过拉米夫定治疗的门诊患者,纳入B组。两组患者的其他类型肝炎病毒(庚型、戊型、丙型、甲型)检测,均为阴性。两组患者在年龄、性别方面比较,P>0.05,差异无统计学意义,有可比性。
  1.2 方法
  采集两组患者的静脉血(2ml)后,以干燥玻璃管保存,离心5分钟(1500r/min),采集上层清夜备用。取100μl血清样本,加入PEG6000(50μl、20%),混匀后离心10分钟,吸出上清液(150μl),保留沉淀,然后加入裂解液(25μl),将沉淀调离管底,吹洗5次。将沉淀打散后,温育(100℃)10分钟,再离心10分钟,转移上清液,获得DNA纯化溶液。采用荧光定量 PCR技术、DNA测序技术进行 HBV分型和HBV P区耐药突变点检。
  1.3 统计学方法
  应用SPSS18.0统计学软件对研究数据进行处理、分析,相关数据比较采用卡方检验,P<0.05为差异有统计学意义。
  2  结果
  两组患者的基因分型比较,详见表1。由表1可知,两组患者的HBV基因分型(B型、C型、D型、其他型)比较,差异均不具有统计学意义,P>0.05。
  表1 两组患者的基因分型比较[n,%]
  基因型 A组(n=60) B组(n=60)
  B          13(21.7)    15(25.0)
  C          42(70.0)    40(66.7)
  D          5(8.3)         5(8.3)
  其他     0(0.0)         0(0.0)
  两组患者的HBVP区耐药突变点比较,详见表2。从表2可知,两组患者主要存在阿德福韦酯、拉米夫定耐药株。A组中,有26例的突变株存在于拉米夫定位点,占43.3%,B组有6例的突变株存在于拉米夫定位点,占10.0%,组间比较,差异有统计学意义(P<0.05);A组有4例的突变株存在于阿德福韦酯位点,占6.7%,B组有3例(5.0%),组间比较无显著性差异(P>0.05);A组其他突变耐药株3例(5.0%),B组10例(16.7%),组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。
  表2 两组患者的HBVP区耐药突变点比较
  
  
  3  讨论
  耐药性是乙肝病毒拮抗抗病毒药物发生的基因改变,病毒耐药性的产生会严重影响治疗效果,增加治疗难度[2]。据实验研究显示[3],发生对拉米夫定耐药的rtM204V、rtL180M双变异或者rtM204I变异HBV病毒,对替比夫定的抗病毒应答率会降低1000倍以上。
  本次研究结果显示,A组与B组的HBV分型比较,无明显差异(P>0.05);但接受拉米夫定治疗的A组患者,广泛存在拉米夫定耐药株(43.3%),其中16例(26.7%)都为204位点突变。这一结果与国内相关文献报道相符[4]。本次研究中所选取的接受过拉米夫定治疗的患者均为治疗超过1年的住院患者,研究结果也提示乙肝患者在接受拉米夫定治疗后,机体耐药性会明显提高,对于此类患者做耐药检测具有重大意义。本次研究结果显示,接受过拉米夫定治疗的乙肝患者,广泛存在多位点同时突变,通过基因序列测定,可检测到易突变区域的完整序列,临床医师可根据基因序列与患者药物应答状况做纵向及横向比较,以确定耐药突变,从而根据分析结果调整治疗方案,提高治疗效果。同时,本研究也显示未接受治疗的B组患者的突变位点较为分散,同时也存在与核苷酸类药物不相关位点突变,这些位点突变的产生是否与核苷酸类药物有关,是否为驱动性突变,还有待进一步研究证实[5]。
  参考文献
  [1]荣海燕,张朝霞.乙型肝炎病毒耐药突变与HBV-DNA量和HBeAg之间的相关性研究[J].实用医学杂志,2013,29(3):404-406.
  [2]陈占国,李艳,童永清等.焦磷酸测序法检测乙肝病毒P区基因耐药突变的临床应用研究[J].中华检验医学杂志,2013,36(12):1091-1095.
  [3]宫航宇,綦盛麟,石铭等.拉米夫定和α-干扰素序贯治疗e抗原阴性乙肝患者及其对拉米夫定耐药突变的抑制[J].中国医药导报,2011,08(14):25-28.
  [4]杨芳.核苷(酸)类似物相关HBV逆转录酶耐药突变的焦磷酸测序及个体化治疗[D].山东大学,2011.
  [5]李延武,李卓成.356例乙型肝炎患者病毒分型及拉米夫定治疗所致耐药突变株变化分析[J].实用临床医药杂志,2013,17(13):27-29.
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