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1.杭州信海医药科技有限公司 浙江省杭州市 310000
2.杭州中美华东制药有限公司 浙江省杭州市 310000
摘要：目的：建立索玛鲁肽原料药中甲醇、异丙醇、乙腈、甲基叔丁基醚、三乙胺5种溶剂的检测方法。方法：采用Agilent DB-624(30m×0.53mm，3μm)毛细管柱；起始温度40℃，维持10min，以每分钟20℃的速率升温至200℃，维持7min；进样口温度200℃，检测器温度250℃，流速2ml/min；顶空平衡温度100℃，平衡时间20min。结果：5种溶剂均达到完全分离，方法灵敏度高，在LOQ~200%限度范围内浓度和峰面积之间线性关系良好，精密度和回收率良好。结论：本方法能简便、灵敏及准确地检测索玛鲁肽原料药溶剂残留量。
关键词：索玛鲁肽；气相色谱法；顶空进样；残留溶剂
1仪器与设备
Agilent 6890 Plus气相色谱仪、Agilent 7694E顶空进样器
2试剂试药
二甲基亚砜、甲醇、异丙醇、乙腈、三乙胺、甲基叔丁基醚和索玛鲁肽原料药
3试验方法与结果
3.1色谱条件
以6%氰丙基苯-94%二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱为色谱柱[DB-624，30m×0.53mm，3μm]。起始温度40℃，维持10min，以20℃/min的速率升温至200℃，维持6min；进样口温度200℃，检测器温度250℃，流速2ml/min，顶空平衡温度100℃，平衡时间20min。
3.2溶液配制
空白溶液：二甲基亚砜(DMSO)。
定位溶液：分别取甲醇、异丙醇、乙腈和甲基叔丁基醚各10mg，精密称定，置不同50ml量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
对照品溶液：取甲醇240mg、异丙醇400mg、乙腈32.8mg、甲基叔丁基醚400mg、三乙胺25.6mg，精密称定，置同一50ml量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取0.5ml，置20ml量瓶中，用稀释剂稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置20ml顶空瓶中，压盖密封，作为对照品溶液。
供试品溶液：取索玛鲁肽原料药约80mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，加2ml DMSO使溶解，压盖密封，即得。
3.3专属性试验
依次进样空白溶液、定位溶液和对照品溶液，记录色谱图，实验结果见图1、见表1。结果表明：空白溶液不干扰各溶剂的检测，各溶剂峰之间分离度符合要求(＞1.5)。
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图1对照品溶液色谱图
(1：甲醇；2：异丙醇；3：乙腈；4：甲基叔丁基醚；5：三乙胺)
3.4进样精密度
取对照品溶液，连续进样6次，计算各溶剂峰面积及保留时间RSD。结果：甲醇、异丙醇、乙腈、甲基叔丁基醚、三乙胺峰面积的RSD分别为2.4%、2.5%、2.3%、2.6%、2.7%，保留时间的RSD分别为0.5%、0.5%、0.4%、0.3%、0.1%，说明本方法精密度良好。
3.5检测限与定量限
根据对照品溶液中各溶剂峰的响应值，逐级稀释后进样，以信噪比3:1作为检测限，以信噪比10:1为定量限，记录色谱图。结果：甲醇、异丙醇、乙腈、甲基叔丁基醚、三乙胺的检测限分别为1.520、1.879、1.128、0.0925、0.114μg/ml，定量限分别为3.041、3.758、2.257、0.185、0.227μg/ml。
3.6线性与范围
以各溶剂定量限为最低浓度，以200％限度浓度为最高浓度，分别配制6个浓度的线性溶液，照“3.1色谱条件”进样，以测得峰面积对溶剂浓度的函数作图，用最小二乘法进行线性回归，结果见表2。结果表明，在线性范围(LOQ~200%)内，各溶剂的峰面积与浓度之间线性关系良好。
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3.7回收率
取供试品约80mg，精密称定，置20ml顶空瓶中，平行10份，分别加2ml空白溶液，80%、100%、120%对照品溶液溶解，每个浓度配制3份样品，按样品测定的方法进行回收率测定，计算时扣除原料药中所含的残留溶剂量，结果：甲醇回收率为100.2%，RSD为4.2%；异丙醇回收率为100.3%，RSD为4.4%；乙腈回收率为97.0%，RSD为6.0%；甲基叔丁基醚回收率为97.9%，RSD为3.9%；三乙胺回收率为96.1%，RSD为7.8%；各溶剂回收率均在80%~120%之间，RSD均小于10%，说明该方法回收率良好，准确度高。
4讨论
4.1溶剂的选择
不同盐型索玛鲁肽的溶解性差异较大，钠盐易溶于水，无盐的索玛鲁肽在水中难溶。虽然在样品用二甲基亚砜中容易形成凝胶，但顶空加热后样品完全溶清，不影响检测。为了使该方法能够适用于不同盐型的索玛鲁肽原料药残留溶剂测定，选择二甲基亚砜作为溶剂。
4.2进样方式选择
残留溶剂测定的进样方式有溶液直接进样和顶空进样[1]。采用顶空进样技术，对溶液中的残留溶剂具有富集作用，可消除样品基质的潜在干扰，对仪器污染少，并可有效保护色谱柱[2-3].
4.3色谱柱选择
色谱柱的选择是残留溶剂分析方法开发的关键部分。原料药残留溶剂测定常选用中等极性色谱柱[4]，例如6%氰丙基苯-94%二甲基聚硅氧烷固定相。它具有较高的温度范围和较高的保留度，可最大限度地兼容各种极性的待测溶剂，使待测溶剂理论塔板数、拖尾因子和分离度最优化[5]。
结语：建立了顶空气相色谱法测定索玛鲁肽原料药中残留溶剂的方法，方法验证结果符合中国药典的要求。该方法能简便、灵敏及准确地检测索玛鲁肽中甲醇、异丙醇、乙腈、甲基叔丁基醚和三乙胺5种溶剂的残留量，能更好的控制索玛鲁肽原料药的质量。
参考文献：
[1]国家药典委员会. 中华人民共和国药典（四部）[S]. 北京：中国医药科技出版社，2020，附录0861残留溶剂测定法.
[2]胡慧廉. 顶空气相色谱法测定氟尼辛葡甲胺原料药中有机溶剂残留量[J]. 色谱，2012，30(1)：99-102.
[3]胡剀，宋珊珊，王向军. GC测定拉科酰胺原料药中的5种残留溶剂[J].中国现代应用药学，2014，31(3)：343-345.
[4]崇小萌，胡昌勤. 利用中等极性气象色谱系统分析药物残留溶剂[J].药物分析杂质，2014，14(11)：2048-2053.
[5]何文胜，程伟青，陈忠. HS-GC法测定依鲁替尼原料药中6种残留溶剂[J]. 井冈山大学学报(自然科学版)，2020，41(6)：22-26.