摘要：分别采用考马斯亮蓝G-250法、蒽酮比色法、酸水解法、2,6-二氯酚靛酚钠法测定不同生长时期的藜蒿蛋白质、总糖、脂肪、抗坏血酸的含量，研究藜蒿生长过程中这些质物的含量变化规律及它的营养价值。
关键词
藜蒿；营养成分；含量测定
前言
现代药理研究发现：藜蒿根味甘、性凉，其叶味甘、性平，具有清凉、开胃、预防牙痛及喉痛、平抑肝火、解毒等功效。对藜蒿的保健药理作用，早在明代时，李时珍便在《本草纲目》中记载藜蒿可“补中益气，利膈开胃，疗心悬，久服轻身、耳目聪明，长毛发令黑”等。民间常以全草入药，认为可止血消炎，化痰镇咳，开胃健脾，散寒除湿。野生藜蒿叶精选之后，经烘、烤，可炒制成藜蒿茶，有降血脂、降血压、缓解心血管疾病等功效。
1材料与仪器
1.1材料与试剂
材料：实验所用藜蒿采自湖南省怀化市。
试剂：牛血清蛋白、考马斯亮蓝G-250、氢氧化钠、蒽酮、葡萄糖、浓硫酸、95%乙醇、石油醚、盐酸、乙醚、草酸、2,6-二氯酚靛酚钠、碳酸氢钠等均为国产分析纯。
1.2仪器设备
752P型紫外可见光分光光度计(上海光谱仪器有限公司)、AL104型电子天平(梅特勒---托利多仪器(上海)有限公司)、SW-420-2S型恒温水箱(金坛市新航仪器厂)、CS101-IE电热鼓风干燥箱(中外合资重庆四达实验仪器有限公司)。
2方法
2.1材料处理
分别在六个时期（即1、2、3、4、5、6月份）采摘藜蒿，每次实验前将新鲜藜蒿除杂，用自来水反复冲洗几次、晾干。
2.2溶液配制
牛血清白蛋白(1000g/ml)：称取100mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，配制成标准蛋白质溶液。
2.3含量测定原理
2.3.1考马斯亮蓝法测蛋白质含量
考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1h内保持稳定。该反应简单迅速，干扰物质少，灵敏度高。
2.3.2蒽酮比色法测总糖含量
蒽酮法可用于单糖、寡糖和多糖的含量测定，糖含量在30μg左右就能进行测定，并具有灵敏度高、适用于微量样品的测定等优点。
2.4实验方法
2.4.1蛋白质含量的测定
2.4.1.1蛋白质标准曲线的制作
取6只10ml刻度试管，编号，按表1数据配制牛血清白蛋白标准溶液。准确吸取上述各管溶液0.1ml，对应放于另外6支10ml刻度试管中，加入5ml考马斯亮蓝G-250溶液，盖塞，将试管中溶液倒转混合，放置2min后，用10mm光径的比色杯在595nm波长下比色。以吸光值为纵坐标，以蛋白质浓度值为横坐标，制作出标准曲线，得回归方程为：Y=0.00905X+0.00638，R=0.9991。
2.4.1.2样品蛋白质的提取
准确称取藜蒿1.0g，放入研钵中，加2ml0.1mol/lNaOH溶液，研磨成匀，转入到10ml离心管中，再用6ml0.1mol/lNaOH溶液分三次洗涤研钵，洗液一并转入10ml离心管中，用玻棒搅拌，放置30min，放置过程间断搅动数次。以3500rpm的转速离心15min，上清液转入50ml容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，摇匀，碱溶性蛋白则存在于此溶液中。
将上述沉淀用70%乙醇重复提取，操作步骤同上，得醇溶性蛋白溶液。
2.4.2总糖含量的测定
2.4.2.1葡萄糖标准曲线的制作
取6支20ml具塞试管，编号，按表2数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml浓硫酸，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10min，取出冷却至室温，在620nm下比色，测各管溶液的吸光值(A620)，以标准葡萄糖含量为横坐标，吸光值为纵坐标，作出标准曲线，得回归方程为：Y=0.00904X+0.0161，R=0.9992
2.4.2.2样品总糖的提取
准确称取1g藜蒿，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml刻度，摇匀备用。
2.4.3脂肪含量的测定
准确称取藜蒿2g，置于50ml大试管内，加8ml水，混匀后再加10ml盐酸。将试管放入70℃～80℃水浴中，每隔5～10min以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止，约40～50min。
取出试管，加入10ml乙醇，混合。冷却后将混合物移于100ml具塞量筒中，以25ml乙醚分次洗试管，一并倒入量筒中。待乙醚全部倒入量筒后，加塞振摇1min，小心开塞，放出气体，再塞好，静置12min，小心开塞，并用石油醚-乙醚等量混合液冲洗塞及筒口附着的脂肪。静置10～20min，待上部液体清晰，吸出上清液于已恒重的锥形瓶内，再加5ml乙醚于具塞量筒内，塞上塞子，振摇，静置后，仍将上层乙醚吸出，放入原锥形瓶内。将锥形瓶置水浴上蒸干，置于95℃～l05℃烘箱中干燥2h，取出放干燥器内冷却0.5h后称量。
按下列公式计算脂肪含量（M:脂肪和锥形瓶总质量，m:锥形瓶质量）：
3结果与分析
3.1蛋白质含量
按照考马斯亮蓝测定不同时期藜蒿蛋白质的含量可知，藜蒿植物中蛋白质的含量在2月份时达到最高，随着藜蒿植物的生长，从2月份开始，蛋白质含量逐渐下降，到6月份藜蒿植物完全老化时蛋白质含量已达到最低。
3.2总糖含量
按照蒽酮比色法测定不同时期藜蒿总糖的含量可知，藜蒿植物中总糖的含量在1月份到2月份的生长过程中有增长趋势，2月份以后一直呈现下降趋势，这个变化与藜蒿植物中蛋白质含量的变化非常相似。
3.3脂肪含量
按照酸水解法测定不同时期藜蒿脂肪的含量可知，在藜蒿植物的生长过程中，脂肪的含量首先小幅度增加，到3月份时达到最高，然后开始下降。
参考文献：
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