王青 王珊，侯敏娜，许海燕，刘艳红，彭修娟
陕西国际商贸学院 陕西咸阳 712046
摘要：为全面控制咳露口服液质量，保证临床应用安全、可靠性，建立咳露口服液的高效液相色谱法指纹图谱。采用高效液相色谱法，流动相为50％乙腈（A）-0.1％磷酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为280nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，分析时间为40min，进样体积10μl。结果确定了15个共有峰，相似度比较结果显示，10批咳露口服液的 图谱相似度均大于0.900。结果表明建立的咳露口服液指纹图谱，方法稳定、可靠、简便，色谱图展现的各峰分离度较好，特征明显，可作为咳露口服液真伪鉴别的标准，为其质量评价提供参考。
关键词：咳露口服液；高效液相色谱法；指纹图谱；相似度评价
咳露口服液是陕西某药厂生产的品种，由紫菀、川贝母、枇杷叶、麻黄、黄芩、罂粟壳、甘草、薄荷脑八味中药制备而成，具有清热、宣肺、平喘、化痰、止咳的功效，用于风热犯肺、内郁化火所致的咳嗽痰多或吐痰不爽，咽喉肿痛，胸闷气短，感冒咳嗽及急、慢性支气管炎等，现代研究表明其抗过敏、抗炎与抗变态反应的效果明确[1-5]。目前，文献报道大多是测定咳露口服液中黄芩苷[6]、吗啡[7]、苯甲酸钠[8]的含量，未有对其指纹图谱研究的报道；为了更全面、有效控制其内在质量，对其真伪进行鉴定，本论文采高效液相色谱法，以黄芩苷为对照品，建立了咳露口服液的指纹图谱，并对10个批次产品进行相似度评价，为咳露口服液的质量控制提供参考依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
超纯水器（德国赛多利斯）、高功率数控超声波清洗器（昆山舒美超声仪器）、超高效液相色谱仪（Waters2695-2489），Empower色谱工作站；电子天平（Sartorius十万分之一）
1.2 试药
黄芩苷（中国药品生物制品检定所，批号110715-201318）；咳露口服液（批次分别为210126、201206、201205、200420、201004、200206、201125、201227、200302、210133，陕西步长制药有限公司生产）；色谱甲醇、色谱乙腈（Fisher公司）；其余均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂作为色谱柱，流动相为50％乙腈（A）-0.01％磷酸水（B），梯度洗脱，洗脱梯度：0-10min，A 1％→7％，10-12min，A 7％→11％，12-25min，A 11％→52％，25-40min，A 52％→100％，分析时间40min。检测波长：280nm，流速：1.0ml/min，进样量为10μl。
2.2 溶液的制备
对照品溶液的制备：精密称取黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含黄芩苷3.1mg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：精密量取咳露口服液20ml，置于具塞锥形瓶中，再加入无水乙醇30ml，摇匀，静置48h，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。
2.3方法学考察
2.3.1精密度考察
精密量取同一批次（批号210133）咳露口服液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以黄芩苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积，结果表明，参照峰的保留时间的RSD为0.181％，参照峰的峰面积的RSD为0.662％，表明仪器的精密度良好。
2.4 稳定性实验
精密吸取同一批次（批号210133）咳露口服液，将制备的供试品溶液在0、2、4、8、12、24h依次进样10μl进行分析。以黄芩苷为参照峰，计算保留时间和相对峰面积，结果参照峰的保留时间的RSD为0.108％，参照峰的峰面积的RSD为0.142％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。
2.5 重复性试
取同一批次（批号210133）的样品，分别精密吸取6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，记录色谱图。以黄芩苷为参照峰，计算相对保留时间和相对峰面积，结果表明参照峰的保留时间的RSD为0.040％，参照峰的峰面积的RSD为0.375％，说明该方法重复性良好。
2.6 指纹图谱的建立和相似度分析
取10个批次的咳露口服液（批号210126、201206、201205、200420、201004、200206、201125、101227、200302、210133）按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进行HPLC分析，建立指纹图谱。通过同样的色谱条件，进行对照品溶液分析，通过对比，确认11号峰为黄芩苷，最终得出15个比较清晰、峰形好的共有峰。
2.7 相似度计算
通过使用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”相似度评价的系统软件，将最优条件下所得到的10个批次的咳露口服液的HPLC指纹图谱通过进行叠加比较，得到了咳露口服液的指纹图谱叠加图，结果见图1，并对10个批次的样品与对照图进行整体相似度评价，结果见,1。通过将10个批次的样品与对照指纹图谱相比较，可以得出其相似度平均值为0.9989，表明10批样品与对照指纹图谱相似度良好，对照图谱可作为咳露口服液的指纹图谱。
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表1 10批咳露口服液指纹图谱相似度
编号 相似度 编号 相似度
S1 0.999 S6 0.999
S2 1.000 S7 0.996
S3 0.999 S8 0.999
S4 0.999 S9 0.999
S5 0.999 S10 1.000
3 讨论
采用全波长扫描，结果280nm谱峰数目较多，各色谱峰的丰度适中，同时比较了10％甲醇-水、50％乙腈-水、50％乙腈-0.05％磷酸水、50％乙腈-0.01％磷酸水系统，结果表明50％乙腈-0.01％磷酸水系统哥色谱峰峰形好，分离效果最佳。
本论文通过HPLC测定10批咳露口服液，建立了咳露口服液的指纹图谱，并采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”评价10批咳露口服液的指纹图谱整体相似度，结果10批样品指纹图谱的相似度均大于0.99。本文所建立的HPLC指纹图谱可用于咳露口服液的真伪鉴定，为咳露口服液的质量控制提供了科学依据。
参考文献
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[作者简介]王青，王青（1987-）女，讲师，硕士，主要从事药物分析及质量控制工作；
[基金项目] 陕西省教育厅2021年度一般专项科研计划项目（21JK0517）；陕西省科技厅重点研发计划一般项目（2021SF-386）；陕西国际商贸学院校级课题一般项目（SMXY202019）。