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摘要：本研究采用柱前衍生-超高效液相色谱法测定土壤中草甘膦的含量，确定其方法测定下限为0.01mg/kg；精密度为1.12-3.24 %；在0.02-0.1mg/kg添加水平内其回收率为91.1-99.1%。研究表明柱前衍生-超高效液相色谱法精密度及准确度较高，是较为稳定便捷的测定土壤中草甘膦的方法。
关键字：柱前衍生 超高效液相色谱法 土壤 草甘膦
1 绪论
草甘膦，N-(磷酸甲基)甘氨酸，（Glyphosate,CAS1071-83-6），化学式C3H8NO5P，是一种传导型广谱灭生性有机膦类除草剂[1]。随着近年草甘膦使用量及范围的激增，且其在土壤中具中等持留性（t1/2 在1-174d），其在土壤环境中的污染越发受到关注。草甘膦会对非靶标植物以及后茬作物产生很大毒性危害，具有广泛生殖毒性、诱突变性等一些环境激素效应，对生态环境和人体的潜在危害极大。因此加强环境中草甘膦的监控，对于环境质量保障具有重要意义。
草甘膦进入土壤后易与铁、铝等金属离子结合成不溶于水的化合物，提取较难，而草甘膦极易溶于水，难溶于有机试剂，挥发性低，缺少显色基团，难以直接利用常规方法进行检测。国内外测定草甘膦的方法主要有离子色谱法[3]、分光光度法[4]、气相色谱法[5]、液相色谱法[6]、气相质谱法[7]、液相色谱质谱法[8]，各质谱法因仪器昂贵，难以在基层普及，为满足基层推广土壤中草甘膦的检测方法，拟研究采用柱前衍生法-超高效液相色谱法进行检测。
2 材料与方法
2.1 仪器及试剂
日本岛津Nexera UHPLC LC-30A超高效液相色谱仪，配RF-20A xs荧光检测器（岛津C18色谱柱Shim-pack GIST 100mm×2.1mm，2μm）；上海安亭TGL-16aR高速离心机；北京赛多利斯BP221S电子天平；德国WIGGENS vortex 3000涡旋仪；美国Milli-Q超纯水机。
草甘膦（SB 05-050-2008）标准品（100μg/mL,农业部环保所）；甲醇（HPLC级,德国默克）；二氯甲烷（HPLC级,上海安谱）；乙腈（HPLC级,上海安谱）；C18固相萃取柱（500mg/6ml，上海安谱）；9-芴甲基氯酸酯(FMOC-Cl,≥99%，上海阿拉丁)；柠檬酸钠，磷酸钠，四硼酸钠均为优级纯（上海麦克林）。
2.2实验方法
2.2.1溶液配制
草甘膦标准溶液：取草甘膦标准品纯水稀释配制成1.00mg/L浓度的中间储备液，使用前再用纯水配制为0.01，0.025，0.05，0.1，0.5mg/L的标准曲线。
FMOC-Cl衍生化试剂：称取50.0mg 9-芴甲基氯甲酸酯（FMOC-Cl）标准品，溶解于少量乙腈中，定容至50ml。
四硼酸钠溶液（0.050mol/L）：称取四硼酸钠1.91g溶解于少量去离子水中，定容至100ml,磷酸钠和柠檬酸钠混合提取液：准确称取11.4g磷酸钠和2.94g柠檬酸钠，用水溶解并定容至1L。
2.2.2仪器方法
流动相B：乙腈；流动相A：0.2%磷酸溶液；流速：0.4ml/min；柱温：35℃；进样量：5μl；激发波长：254nm；发射波长：301nm；梯度洗脱：0-5min流动相B 35%-25%，5-7.5min流动相B 25%-80%,7.5-8.5min流动相B 80%-35%,8.5-10min流动相B 35%保持。
2.2.3样品处理
称取10.00g土壤于50mL离心管中，加入磷酸钠和柠檬酸钠混合提取液，超声提取30min，高速离心机8000r/min离心5min，取上清液过滤纸，然后过C18柱固相萃取柱净化，加入50mL二氯甲烷，充分振荡后静置，弃去有机相，重复萃取两次。取1.00ml净化后的水溶液于1.5ml聚乙烯塑料管中，加入0.12ml四硼酸钠溶液和0.2mlFMOC-Cl衍生化试剂,常温下混匀仪衍生4h，反应液过0.22μm针式过滤器滤膜，上机测定。
2.3 结果与讨论
2.3.1线性范围、检出限及定量限
绘制一系列质量浓度（0.01-0.5mg/L）的标准曲线，线性方程Y=129028*X-159220，相关系数0.9996，以估计方法检出限值2-5倍的样品进行11次平行测定计算标准偏差，确定其检出限及定量限，检出限0.0025mg/kg，定量限0.01mg/kg，其UHPLC色谱图及标准曲线见图1。
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图1草甘膦色谱图（0.5mg/L）及标准曲线
2.3.2精密度及准确度
对含草甘膦0.04-0.2mg/kg浓度的土壤样品分别进行6次平行测定，计算其相对标准偏差分别为1.12-3.24%。以空白土壤进行0.02-0.1mg/kg浓度的加标测试，计算加标回收率，测试结果为回收率91.1-99.1%。
3 结论
本研究采用柱前衍生-超高效液相色谱法测定土壤中草甘膦的含量，确定其方法测定下限为0.01mg/kg；精密度为1.12-3.24 %；在0.02-0.1mg/kg添加水平内其回收率为91.1-99.1%。研究表明柱前衍生-超高效液相色谱法精密度及准确度较高，是较为稳定便捷测定土壤中草甘膦的方法。
参考文献:
[1]SUN Y J,WANG C Y,WEN Q Y,et al.Determination of glyphosateand aminomethylphosphonic acid in water by LC using a new labelingreagent,4-methoxybenzenesulfonyl fluoride[J].Chromatographia,2010,72(7-8):679-686.
[2]Zhu Y，Zhang F，Tong C，et a1．Determinationof glyphosate by ion chromatography[J]．Journal of Chromatography A，1999，850(1-2)：297-301．
[3]昊淑彬，刘国红，王欣茹，等．紫外分光光度法检测血清草甘膦中毒方法的建立和应用[J]．国际检验医学杂志，2014(8)：1024．1025．
[4]王天玉，武秀停，赵静，等．固相萃取．气相色谱法测定薏苡仁、白茯苓和山药中的草甘膦残留[J]．分析科学学报，2014，30(1)：63．66．
[5]He J，Yu J S，Hou Y J，et a1．Determinationof iminodiacetic acid in the glyphosate byion chromatography[J]．Chinese ChemicalLetters，2014，25(10)：1392—1394．
[6]罗彤，付文雯，郭卢云，等．QuEChERS．气相色谱．三重四级杆串联质谱法测定茶叶中草甘膦和氨甲基膦酸残留[J]．食品研究与开发，2018，39(14)：153-158．
[7]李波，邓晓军，郭德华，等．高效液相色谱串联质谱法检测食品中的草甘膦及其主要代谢物氨甲基膦酸残留[J]．色谱，2007，25(4)：486．490．