摘要：目的 通过对抗SSA抗体（包括抗Ro60抗体和抗Ro52抗体）阳性患者的可提取核抗原（ENA）抗体谱、抗核抗体（ANA）免疫荧光检测和临床信息进行分析，为临床诊断自身免疫性疾病提供参考。方法 随机选取普洱市人民医院2018年1月至2019年1月门诊及住院的抗SSA抗体阳性患者471例，同时检测ENA抗体谱和ANA，采用免疫印迹法检测ENA抗体谱；间接免疫荧光法检测ANA，并对检测结果进行统计学分析。 结果 在471例抗SSA抗体阳性的患者中，结果可出现三种情况：Ro60（+）Ro52（+）、Ro60（+）Ro52（－）和Ro60（－）Ro52（+）；同时检测ANA的荧光模型以细胞核斑点型为主36%，其次为混合荧光模型34%，ANA滴度主要分布于1:100~1:3200；抗SSA抗体阳性在ENA抗体谱中与其余6种抗体同时检出的阳性率为：抗nRNP42%、抗SSB26%、抗Rib-P19%、抗Sm8%、抗Jo-1 3%、抗Scl-70 2%；Ro60在自身免疫性疾病中所占比例较Ro52高（P＜0.05）；Ro52在非自身免疫性疾病中所占比例较Ro60高（P＜0.05）。结论 抗SSA抗体在自身免疫性疾病和非自身免疫性疾病中均有分布，诊断特异性较差，抗SSA抗体阳性应联合检测ENA抗体谱和ANA免疫荧光，以及患者的临床表现综合考虑，来减少自身免疫性疾病的误诊和漏诊率。
关键词： 抗SSA抗体；ENA；ANA；自身免疫性疾病
Study on the clinical application value of anti-SSA in autoimmune diseases
Luo Dan
(Clinical laboratory, puer people's hospital, yunnan province, puer 665000, Yunnan)
Abstract：Objective By analyzing the spectrum of extractable nuclear antigen (ENA) antibody, ANA immunofluorescence detection and clinical information of patients with positive anti-SSA (including anti-Ro60 and anti-Ro52 ), it provides references for clinical diagnosis of autoimmune diseases. Methods From January 2018 to January 2019, 471 patients with anti-SSA positive in outpatient clinics and hospitals of?pu 'er people's hospital were randomly selected. Meanwhile, ENA antibody spectrum and ANA were detected . The ENA antibody spectrum was detected by western blotting.ANA was detected by indirect immunofluorescence method and the results were statistically analyzed.? Results In 471 patients with positive anti-SSA , the results were shown in three cases: Ro60 (+) Ro52 (+), Ro60(+) Ro52 (-) and Ro60 (-) Ro52 (+);Meanwhile, the fluorescence model of ANA results detected was mainly 36% nuclear speckle type, followed by the mixed fluorescence model of 34%, and the ANA titer was mainly distributed from 1:100 to 1:3200;The positive rates of anti-SSA positive detected at the same time with the other 6 antibodies in ENA antibody spectrum were: anti-nRNP42%, anti-SSB26%, anti-Rib-P19%, anti-Sm8%, anti-Jo-13% and anti-Scl-702%;Ro60 accounts for a higher proportion of autoimmune diseases than Ro52(P < 0.05); Ro52 accounts for a higher proportion of non-autoimmune diseases than Ro60(P < 0.05).Conclusion Anti-SSA are distributed in autoimmune diseases and non-autoimmune diseases with poor diagnostic specificity. Anti-SSA positivity should be combined with the detection of ENA antibody profile and ANA immunofluorescence, as well as the patient's clinical presentation, to reduce the rate of misdiagnosis and missed diagnosis of autoimmune diseases.
Key words:?Anti-SSA;ENA;ANA;autoimmune diseases
抗SSA抗体与各种自身免疫性疾病相关，最常见于干燥综合征（SS），但也可见于系统性红斑狼疮（SLE）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）、多肌炎/皮肌炎(PM/DM)、混合性结缔组织病（MCTD）等多种自身免疫性疾病以及一些非自身免疫性疾病［1］。抗SSA抗体包括抗Ro60抗体和抗Ro52抗体，Ro60为天然的SSA抗原，是一种小核糖核酸蛋白，由一个RNA分子和一个60kDa蛋白分子组成，而Ro52是重组的抗原，Ro52蛋白是三基序（Tripartitemotif,TRIM）蛋白家族中的一员，靶抗原为TRIM21，故又称为TRIM21［2-3］。既往认为抗Ro60抗体和抗Ro52抗体属于同一抗体系统，目前研究表明两者不属于同一抗体系统，是独立的抗体系统，且两者具有不同的临床意义［3］。由于以上两种抗体在多种自身免疫性疾病中分布广泛，在免疫印迹法中检出率较高，缺乏疾病特异性，因此本文回顾性分析了471例抗Ro60抗体和抗Ro52抗体双阳、单阳患者的临床信息，两种抗体与ENA抗体谱中其它自身抗体的关系，并同时分析ANA的荧光模型特点，来探讨抗Ro60抗体和（或）抗Ro52抗体阳性的临床应用价值。
资料与方法
1检测对象
收集2018年1月～2019年1月普洱市人民医院门诊及住院的抗SSA抗体免疫印迹法阳性并同时用间接免疫荧光法检测ANA的患者471例，其中男78例，女393例，男女比例为1:5。年龄范围15～91岁。依据抗SSA抗体阳性结果表现不同分为：Ro60（+）Ro52（+）200例、Ro60（+）Ro52（－）140例和Ro60（－）Ro52（+）131例三组。根据患者的临床信息将疾病进行分组，自身免疫性疾病185例；非自身免疫性疾病147例；没有明确诊断怀疑自身免疫性疾病139例。
2材料与方法
2.1 ENA检测方法 采用免疫印迹法（LIA）检测患者的ENA抗体，包括抗nRNA、Sm、Ro60、Ro52、SSb、Scl-70、Jo-1、Rib-P共8种不同抗原的免疫球蛋白G抗体。检测试剂为欧蒙医学实验诊断股份公司的原装试剂，患者样本用样本缓冲液1:101稀释，按照试剂说明书进行实验操作。
2.2 ANA检测方法 采用HEp-2细胞/猴肝为基质，间接免疫荧光法（IIF）检测患者的ANA，检测试剂为欧蒙医学实验诊断股份公司的原装试剂，患者样本用PBS吐温缓冲液1:100稀释，按照试剂说明书进行实验操作，荧光显微镜下镜检。
3结果判断
3.1 ENA结果判断 采用欧蒙配套的EUROLineScan软件对膜条抗原带的着色强度进行扫描分析，根据着色强度来判断样本的阴阳性。
3.2 ANA结果判断 根据特异性荧光模型来进行定性和抗体滴度的结果判断，HEp-2细胞不显示特异性荧光模型时判断为阴性；具有一定荧光但无法辨别荧光模型时判断为可疑；HEp-2细胞显示特异性荧光模型且滴度≧1:100时判断为阳性，阳性血清再按1:320、1:1000、1:3200、1:10000继续稀释测得抗体最终滴度。
4 统计学分析
根据抗SSA抗体阳性的实验室结果，图1和图2采用饼状图来进行数据间比较，表3部分数据采用SPSS17.0统计软件进行分析，采用卡方检验来比较Ro60和Ro52与疾病的关系，P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
1 抗SSA抗体阳性的ANA荧光模型
如图1所示,在471例抗SSA抗体阳性的患者中，ANA免疫荧光阳性结果有373例，可疑结果有58例，阴性结果有40例。ANA所显示的特异性荧光模型以细胞核斑点型所占比例最高，有169例，其次为混合荧光模型（包括细胞核斑点型和均质型、细胞核斑点型和胞浆型、细胞核斑点型和着丝点型、细胞核均质型和胞浆型等）160例，其它特异性的荧光模型也有，因例数较少没有纳入其中分析。ANA滴度1:100~1:10000均有分布，主要分布于1:100~1:3200。
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2 抗SSA抗体与其余6种ENA抗体谱的关系
如图2所示,在免疫印迹法检测ENA抗体谱时，在471例抗SSA抗体阳性的患者中，同时伴随其余6种ENA抗体谱中的任意一种抗体或者几种抗体出现的患者共有182例，其中抗SSA抗体和抗nRNP抗体同时检出77例，较其余5种抗体所占比例最高，其次为抗SSB47例，抗Rib-P34例，抗Sm14例，抗Jo-1 6例，抗Scl-70 4例。
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3 抗SSA抗体与疾病的关系
如表3所示，Ro60（+）Ro52（+）疾病分布主要在自身免疫性疾病中的系统性红斑狼疮（SLE）和干燥综合征(SS)；Ro60（+）Ro52（－）疾病分布主要在自身免疫性疾病中的系统性红斑狼疮(SLE)和结缔组织病(CTD)；Ro60（－）Ro52（+）疾病分布主要在非自身免疫性疾病中的肝脏疾病和肺部疾病。Ro60在自身免疫性疾病中所占比例较Ro52高（P＜0.05），Ro52在非自身免疫性疾病中所占比例较Ro60高（P＜0.05）。
表3 抗SSA抗体阳性与疾病的关系［n（%）］
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注；肾脏疾病：肾小球肾炎、肾病综合征、高血压性肾病、肾功能衰竭等；肝脏疾病：肝功能异常、肝炎、肝硬化、肝癌等；脑部疾病：脑卒中、脑梗塞、颅内出血、病毒性脑炎等；心血管疾病： 心功能不全、房颤、心肌炎、心包炎等；肺部疾病：肺炎、肺结核、肺纤维化、肺癌等：血液系统疾病：白细胞减少，血小板减少、贫血、淋巴瘤等；其他疾病：骨质疏松、头痛、糖尿病、水肿、梅毒、腹水等。
讨论
抗SSA抗体属于可提取核抗原（ENA）抗体谱中的抗体之一，在临床实践中被广泛检测，对于自身免疫性疾病的诊断有重要的临床价值［4］，可作为干燥综合征的诊断标准之一［5］。抗SSA抗原广泛分布于人体的肝、肾、淋巴细胞、成纤维细胞、上皮细胞等组织细胞胞浆和胞核中［6］，抗SSA抗原不同的表位存在不同的优势和劣势［7］，与患者体内产生的不同抗体就会有不同的结合位点，进而引起不同的组织器官损伤，临床表现也会复杂多样［8］。天然的SSA抗原只有Ro60不存在Ro52，Ro52就会成为一种独特的抗体，具有直接的致病因素和独特的临床特性。因此，最近的注意力转向了这种抗体及其临床关联和效用［2］。因这两种抗体在临床实践中检出率比较高，本研究中把两种抗体一起进行了分析。
在本回顾性分析中，调查对象为抗SSA抗体阳性人群，包括Ro60（+）Ro52（+）、Ro60（+）Ro52（－）和Ro60（－）Ro52（+），男女比例为1:5，女性患者居多，符合自身免疫性疾病的特点。在ANA阳性结果中所显示的特异性荧光模型以细胞核斑点型为主，其次为混合荧光模型，滴度主要分布在1:100~1:3200。细胞核斑点型一般分为细颗粒斑点型和粗颗粒斑点型，细颗粒斑点型常见于抗SSA抗体、抗SSB抗体，主要见于原发性干燥综合征（SS），也可见于SLE、RA、PBC及PM等自身免疫性患者中。粗颗粒斑点型常见于抗Sm抗体、抗nRNP抗体。国际共识中，细颗粒斑点型和粗颗粒斑点型为选报荧光模型［9］，本研究中也没有把两者区分开，统一报细胞核斑点型。抗SSA抗体的混合荧光模型中以细胞核斑点型合并其它模型为主，说明患者体内除了产生抗SSA抗体还伴随有其它自身抗体的产生。也有一部分抗SSA抗体阳性时，ANA免疫荧光结果为阴性，原因可能是HEp-2细胞为人喉癌上皮细胞，核抗原丰富且含量高，但基质中的抗原会受环境、温度以及实验室技术人员的操作不当等因素的影响，致使部分特异性抗体检测不出来［10］。所以临床怀疑患者存在自身免疫性疾病时，ENA抗体谱和ANA免疫荧光检测两种实验应同时进行检测，避免特异性抗体的漏检。
本研究中将抗SSA抗体与ENA谱中其余6种抗体进行了比较分析，结果显示当抗SSA抗体检测阳性时，与其余6种抗体中的任意一种抗体或者几种抗体均有同时检出过，其中与抗nRNP检出率最高，其次为抗SSB和抗Rib-P，与抗Sm、抗Jo-1和抗Scl-70 相对前面三种抗体检出率较低。高滴度的抗nRNP为MCTD的特征性的血清标志，抗SSB和抗SSA同时阳性主要出现在SS，抗Rib-P和抗Sm为SLE的特异性自身抗体,抗Jo-1见于多发性肌炎和皮肌炎，抗Scl-70见于系统性硬化症。以上提示抗SSA抗体与MCTD、SS、SLE的诊断可能有较高的临床应用价值。
本研究表3结果显示Ro60和Ro52均分布在自身免疫性疾病、非自身免疫性疾病和怀疑自身免疫性疾病中，累及的系统和脏器比较广泛，这与国内学者报道抗SSA抗体阳性人群可合并血液系统、消化系统、皮肤［11-12］以及神经系统［6］等多系统的损害相一致。Ro60在自身免疫性疾病中所占比例较Ro52高，因此，抗Ro60抗体对自身免疫性疾病的临床应用价值可能比抗Ro52抗体高。非自身免疫性疾病和怀疑自身免疫性疾病的患者可能因自身免疫性疾病造成器官组织损伤，尚未确诊［1］。本研究中显示，抗SSA阳性的患者最常见的疾病是SLE，其次是SS和CTD。许多研究证实，抗SSA抗体特别见于新生儿红斑狼疮，当母亲为抗SSA抗体阳性，且抗SSB抗体同时存在时，抗体可通过胎盘到胎儿体内，导致炎症反应和先天性心脏传导阻滞［2,13-14］。抗Ro60抗体与SLE的亚型相关，尤其是在皮肤型红斑狼疮中具有特异性［15］，据鲁芙爱等报道抗Ro60抗体阳性的SLE患者更易继发SS［14］。抗 Ro52抗体不具有疾病特异性，可在肌炎、系统性硬化症、PBC、自身免疫性肝炎及病毒性肝炎中检出［8,16］。国内孙丽梅等报道抗Ro52抗体可能与IgG共同作用，参与I型自身免疫性肝炎［8］。抗Ro52抗体与肺部疾病报道较少，Adrian曾报道抗Ro52抗体可能与间质性肺疾病有关［2］。有文献报道，抗Ro52抗体可能是一种预警生物标记，平均比SLE相关的其他自身抗体提前3-4年出现，可能对SLE的早期诊断具有重要意义［8］。抗SSA抗体中的抗Ro60抗体和抗Ro52抗体不属于同一抗体系统，临床表现也不尽相同。因此，抗SSA抗体阳性是诊断SS的标志性抗体，但不应判断为SS的特异性指标。
综上所述，本研究通过对抗SSA抗体阳性患者的ENA抗体谱、ANA免疫荧光检测和临床信息分析，从而了解到当抗SSA抗体阳性合并ENA抗体谱中其它自身抗体出现时，对诊断自身免疫性疾病的临床应用价值更高。当ANA的特异性荧光模型表现为细胞核斑点型时提示临床患者体内可能有抗SSA抗体的产生，与自身免疫性疾病密切相关。抗SSA抗体中的抗Ro60抗体和抗Ro52抗体在自身免疫性疾病和非自身免疫性疾病中分布广泛，缺乏特异性，临床表现复杂多样，抗Ro60抗体对自身免疫性疾病的临床应用价值比抗Ro52抗体较高。因此，在临床上遇到抗SSA抗体阳性的患者时，应考虑与各种自身免疫疾病相关和非自身免疫性疾病的可能，联合检测ENA抗体谱和ANA免疫荧光，可提高自身免疫性疾病的诊断率。
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