乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测的对照分析

发表时间:2017/9/25   来源:《中国误诊学杂志》2017年第13期   作者:梁爱凤 阚林(通讯作者)
[导读] 在全球众多疾病中,乙型肝炎病毒感染属于高发的疾病之一。

复旦大学附属中山医院青浦分院检验科  上海  201700
  摘要:目的:本实验的课题主要探讨乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测的相关研究。方法:限定到我院检验科进行乙型肝炎病毒感染检测的乙型肝炎病患为研究主体,从中抽取168例。对其病毒血清学标志物(HBV-M)予以酶联免疫法进行相关检测工作,病毒DNA(HBV-DNA)则通过荧光定量PCR检测进行相关工作。分析总结病患乙型肝炎病毒血清学标志物(HBV-M)与病毒DNA(HBV-DNA)检测的结果。结果:对168例乙型肝炎检测后得到,属于HBeAg阳性标本病患以及HBeAg阴性标本的病患分别为106例与62例,就病患标本HBV-DNA阳性率而言,106例HBeAg阳性标本病患检测的阳性病例为106例,阳性率100%,62例HBeAg阴性标本的病患检测的阳性病例为16例,阳性率25.81%(16/62),二者对比差异性较大,得到P<0.05。结论:对乙型肝炎进行检测发现,病患HBV-DNA阳性率与血清标志物之间有一定的联系,HBV-DNA阳性率越高,属于HBeAg阳性标本的概率越大。对乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测的相关研究。可有效的增加乙型肝炎病患检测的概率,对于疾病的治疗防止人员传递感染中起到了重要的作用,具有较高的推广价值。
  关键词:HBeAg阳性标本;HBV-DNA阳性率;乙型肝炎病毒感染
  
  
  在全球众多疾病中,乙型肝炎病毒感染属于高发的疾病之一。从WHO报道的资料可知,全球感染乙型肝炎病毒大约有20亿人[1],而慢性乙型肝炎病毒的感染者就已经达到3.5亿,每年约有100万人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。我国属HBV高流行区,HBsAg携带者高达9300万人,乙肝患者约3000万。研究显示乙型肝炎病毒主要是通过含有乙肝病毒的血液、体液直接进入人体造成传播,乙肝患者与HBsAg携带者都是属于主要的传染源,其中亲密接触与母婴传播是最为主要的传播途径。乙肝的传染性极强,且流行面广,对于人民的身体健康是一个严重的危害[1]。因此对乙型肝炎患者进行相关的检测工作是十分必要的。本文主要探讨乙型肝炎病毒血清学标志物与HBV DNA检测的相关研究,具体报告如下:
  1资料与方法
  1.1一般资料
  收集了我院在2014年6月~2017年5月期间收取的168例乙型肝炎病患的临床资料。其中男性患者85例,女性患者83例,年龄9~51岁,平均(32.25±2.64)岁。全部病患临床症状诊断均符合乙型肝炎病毒感染的诊断标准,本研究已经得到本院伦理委员会同意,患者也知情并同意。
  1.2方法
  ①血样采集:取病患清晨空腹状态下肘静脉血5ml,做离心处理,3000r/min(离心半径15cm)离心10min。完成分离后,将溶血、脂血等标本排除,将血清保存于无抗凝剂干净试管中并及时放入冷冻冰箱,温度控制在-40℃左右,将之作为荧光定量PCR定量分析反应模板。
  ②测定方法:HBV DNA采用实时荧光定量PCR法测定,乙型肝炎病毒血清学标志物采用酶联免疫法测定。
  ③试剂和检验仪器:荧光定量PCR扩增仪选用的是美国ABI公司生产的7500型实时荧光定量PCR仪,而酶标仪则是选用美国公司的设备。HBV-DNA定量试剂盒采用中山大学达安基因股份有限公司生产的乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)。乙型肝炎病毒血清学标志物检测采取我国生产的试剂盒。
  1.3观察指标分析
  对入选的168例乙型肝炎病毒感染患者的临床资料展开回顾性分析,对HBeAg阳性标本和HBeAg阴性标本数量进行统计。以此同时,针对HBeAg阳性标本和HBeAg阴性标本中的HBV-DNA阳性率作一对比[1]。
  1.3应用统计软件统计所得数据
  本次实验得出数据全部都需要实施分析与整理,然后使用统计软件SPSS19.0进行统计学的分析,通过实验研究中出现的所有相关数据均进行整理和分析,通过标准差()来表示计量资料,通过(%)表示计数资料,应用独立的样本t对组间的构成比进行检验,如果实验所得数据经对比以后存在统计的意义,用P<0.05表示。
  2.结果
  2.1检出HBeAg阳性HBeAg阴性情况
  对168例乙型肝炎检测后得到,属于HBeAg阳性标本病患以及HBeAg阴性标本的病患分别为106例与62例,比较差异较为明显,P<0.05,详细数据可见表1
  

    2.2HBV-DNA阳性率分析及对比情况
  106例HBeAg阳性标本病患检测的阳性病例为106例,阳性率100%,62例HBeAg阴性标本的病患检测的阳性病例为16例,阳性率25.81%(16/62),二者对比差异性较大,得到P<0.05。详细数据可见表2.
  3.讨论
  乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的,我国的乙肝患者病毒携带率占全世界的47.24%。乙肝表面抗原(HBsAg)是检验乙肝病毒的主要血清学标准,它没有传染性,一旦HBsAg呈现阳性或弱阳性则表明可能感染了乙肝病毒。不同实验室对HBsAg的低水平弱阳性检验结果不同,就有可能造成不同的诊断结果。HBsAg的弱阳性反应结果主要反映以下几种情况:乙肝潜伏时期;携带乙肝病毒但无明显症状;慢性乙肝疾病;检验误差[1]。常用的ELISA 检测法容易出现对HBV的漏检,而PCR技术可以弥补这个不足,提高对HBV的检出率。
  根据相关权威报道显示[2],针对乙肝肝炎患者的血清标志物HBV-M开展酶联免疫检测,可有效反馈患者体内真实的免疫反应状态。以此同时,取得HBV-DNA阳性例数则表示已被乙型肝炎病毒感染、复制和传播,为患者开展荧光定量PCR检测,可直接反应乙型肝炎病毒感染后体内血清细胞的复制情况。另外,PCR实时荧光测定技术可以直接确定核酸载量,它有效融合了光化学技术、基因扩增与分子杂交机理,检测灵敏度高,可以实现对扩增产物的自动分析,反映出实际的HBV感染状态。通过分析 HBeAg 低水平阳性与HBV-DNA载量之间的关系可以准确诊断出HBeAg低水平阳性HBV患者的感染情况,给医师的临床诊断提供有效可靠的数据支撑,从而做好临床早期干预,避免在无法准确诊断的情况下使乙型肝炎病毒通过输血、器官移植等途径传播感染[3-4]。
  本次重点研究乙型肝炎病毒DNA和血清标志物(HBV-M)的检测结果,检测结果显示:168例乙型肝炎检测后,发现属于HBeAg阳性标本有106例病患,HBeAg阴性标本的病患62例,就病患标本HBV-DNA阳性率而言,106例HBeAg阳性标本病患检测的阳性病例为106例,阳性率100%,62例HBeAg阴性标本的病患检测的阳性病例为16例,阳性率25.81%(16/62),二者对比差异性较大,得到P<0.05。该研究结果与权威研究结果基本符合。有力证明,HBeAg对诊断乙型肝炎病毒感染的主要血清标志物,且与乙型肝炎病毒的DNA有着较为密切的关联,是诊断乙型肝炎病毒复制的主要标识。另外,106例HBeAg阳性标本病患检测的阳性病例为106例,阳性率100%,这也证明HBeAg和乙型肝炎病毒DNA的关系表现为正相关,乙型肝炎病毒复制处于较为活跃状态,具有很强的传染性[5]。
  综上所述,乙型肝炎患者HBV-DNA阳性率和血清标志物(HBV-M)联系密切,对此展开检测发现对患者体内乙肝病毒复制状态有一个较为准确的了解。HBV-DNA阳性率越高,属于HBeAg阳性标本的概率越大,病毒感染性就越强。HBV-M对乙肝病毒感染的患者的机体有一个免疫应答,对疾病转归有一个演示过程,可将两种检测技术结合使用,对于疾病的治疗防止人员传递感染中起到了重要的作用,值得推广应用。
  
  参考文献:
  [1]王丽萍. 时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的对照探究[J]. 国际检验医学杂志,2015,5(07):994-995.
  [2]韩慧,吴娇婵,赵静. 海南省无偿献血者乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果对比分析[J]. 国际检验医学杂志,2013,3(22):3088-3089.
  [3]郭黎英. 乙型肝炎病毒DNA与血清标志物的检测结果分析[J]. 系统医学,2016,5(04):10-11+14.
  [4]王笑石. 乙型肝炎病毒DNA定量与血清学标志物检测的相关分析及临床意义[J]. 中国医药指南,2013,21(27):176-177.
  [5]叶晓云,黄明珠,黄丽霞,李伟征,罗潇. 两种不同免疫检验方法检测乙型肝炎病毒感染血清学标志物的临床对比分析[J]. 现代诊断与治疗,2016,51(22):4348-4349.

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